Réalisation de chromatographie en couches minces pour évaluer la dégradation des exopolysaccharides bactériens

Résumé

Source : Hu, Y., et al. Analyse des interactions entre les endobiotiques et le microbiote digestif humain à l’aide de systèmes de fermentation in vitro dans les bains de baignoire. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre l’utilisation de la chromatographie en couche fine (TLC) pour évaluer la dégradation des exopolysaccharides (EPS) par le microbiote fécal humain. Les fragments d’EPS dans les surnatants de fermentation sont séparés selon leur taille et leur polarité à l’aide de la TLC, puis visualisés sous forme de bandes colorées après une coloration spécifique aux glucides.

Protocole

1. Dégradation des exopolysaccharides (EPS) par le microbiote fécal humain

1. Chargez 0,2 μL de surnadants fermentés sur des plaques d’aluminium en chromatographie fine (TLC) pré-enduites en gel de silice-60, puis séchez à l’aide d’un sèche-cheveux.
2. Développez les plaques dans 20 mL d’une solution d’acide formique/n-butanol/eau (6:4:1, v :v :v) et séchez avec un sèche-cheveux.
3. Faites tremper les plaques dans le réactif Orcinol pour les colorer, puis séchez avec un sèche-cheveux.
   1. Préparez les réactifs d’orcinol en dissolvant 900 mg de lichenol dans 25 mL d’eau distillée, puis en ajoutant 375 mL d’éthanol. En conséquence, l’acide sulfurique concentré doit être ajouté lentement et la solution bien mélangée.
4. Chauffez les assiettes à 120 °C pendant 3 minutes dans un four de cuisson et évaluez la dégradation de l’EPS en mesurant les bandes TLC.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Four de cuisson	Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd	DHG-9240A	À utiliser pour chauffer et cuire
Éthanol	Sigma-Aldrich	E7023	Utilisation pour préparer la vitamine K1
Acide formique	Sigma-Aldrich	399388	Utilisé pour les soins
Lichenol	Solarbio	C8380	Utilisation pour préparer la plaque colorée
n-Butanol	ChemSpider	71-36-3	Utilisé pour les soins
Orcinol	Sigma-Aldrich	447420	Utilisé pour préparer des réactifs à l’orcinol
Acide sulfurique	Sigma-Aldrich	150692	Utilisé pour préparer des réactifs à l’orcinol
Feuilles d’aluminium TLC	MerckMillipore	116835	Utilisé pour les soins