Quantification de la charge bactérienne tissulaire dans un modèle murin d’infection intestinale chronique

Abstract

Source : Lo, C.-B., et al. Fibrose intestinale induite par une infection chronique à Salmonella. J. Vis. Exp. (2019)

La vidéo démontre la quantification de la charge bactérienne dans un modèle murin d’infection chronique par Salmonella typhimurium résistante à la streptomycine. Après l’euthanasie et la dissection stérile, les tissus cæcals et spléniques sont prélevés, homogénéisés avec des billes d’acier pour libérer des bactéries, puis dilués en série. Les dilutions sont placées sur de l’agar sélectif, et les colonies visibles sont comptées pour estimer la charge bactérienne par gramme de tissu dans les sites intestinaux et systémiques.

Protocol

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation de cultures de Salmonella Typhimurium ΔAroA pour le gavage oral de souris

1. À partir d’un stock congelé de glycérol de S. Typhimurium ΔAroA, préparez une plaque de strie à l’aide d’agar Luria-Bertani (LB agar) contenant 100 μg/mL de streptomycine avec une boucle inoculante stérile. Incubez toute la nuit à 37 °C. Les plaques striées peuvent être conservées jusqu’à une semaine à 4 °C.
2. Un jour avant l’infection, préparez l’a....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubes de verrouillage sûrs à fond rond de 2 ml	Eppendorf	22363344
Des perles en acier inoxydable	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Pointes de pipet à grand orifice	Fisher	2707134
Plaques mégabloc de 2 mL	Sarstedt	82.1972.002
Aiguilles de gavage	FST	18061-22
Streptomycine sulfate	Sigma	S9137
Moulin à mélangeur	Retsch	MM