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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Inoculation intranasale de souris avec Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae) cultivée dans un biofilm
- Achetez des souris et utilisez-les à l’âge souhaité.
REMARQUE : Les souris âgées de 3 à 4 mois sont préférées pour modéliser les jeunes hôtes, et les souris âgées de 21 à 24 mois peuvent être utilisées pour modéliser des personnes âgées >65 ans. Les données présentées ici proviennent de souris mâles C57BL/6. - Décongelez les aliquotes bactériennes cultivées dans le biofilm sur de la glace et faites tourner à 1 700 × g pendant 5 minutes. Retirez et jetez soigneusement le surnageant sans perturber le pellet, lavez les bactéries en resuspendant le pellet dans 1 mL de solution physiologique tamponnée phosphate (PBS), puis faites tourner à nouveau à 1 700 × g pendant 5 minutes. Retirez le surnageant et resuspendez la pellete dans le volume nécessaire pour atteindre la concentration désirée (visez 5 ×10 unités formant 6 colonies (UFC)/10 μL pour l’inoculation intranasale). Confirmez les quantités de bactéries administrées en plaquant l’inoculum préparé sur des plaques d’agar sanguin.
- Inoculez les souris par voie intranasale avec 5 × 106 UFC en pipettant 5 μL de l’inoculum dilué dans chaque naris. Veillez à tenir fermement les souris, stabilisant la tête, jusqu’à ce que le volume soit inhalé (généralement quelques secondes après avoir pipeté le volume dans les narines). Effectuer cette étape en l’absence d’anesthésie pour prévenir l’aspiration pulmonaire de l’inocule.
2. Infection virale par le virus de la grippe A (IAV)
- À 48 heures suivant l’inoculation intranasale avec S. pneumoniae, décongelez la souche IAV d’intérêt sur la glace.
REMARQUE : Les données présentées ici concernent une souche adaptée à la souris du virus de la grippe A A/PR/8/34 H1N1, obtenue par échange collaboratif. - Une fois le virus décongelé, diluer le virus dans le PBS à la concentration désirée ; visez 20 unités formant la plaque (PFU)/50 μL pour l’infection intratrachéale et 200 PFU/10 μL pour l’infection intranasale. Pour les groupes infectés simulés et uniquement bactériens, utilisez le PBS pour inoculer les souris.
- Placez du lubrifiant ophtalmique sur les yeux des souris avant l’anesthésie. Anesthésiez les souris avec de l’isoflurane à 5 % et confirmez l’anesthésie par une pincée ferme de l’orteil.
- Une fois l’animal anesthésié, retirez-le de la chambre d’isoflurane et infectez immédiatement les souris anesthésiées avec 50 μL (20 PFU) de VAI intratrachéale à l’aide d’une pince émoussée pour extraire la langue de la bouche et pipeter le volume de liquide dans la trachée.
- Placez les souris dans une cage séparée et surveillez jusqu’à une récupération complète (elles peuvent maintenir la couche sternale [peuvent s’allonger sur la poitrine]).
- Après la récupération, on inocule immédiatement les souris par voie intranasale avec 10 μL (200 PFU) de VAI en utilisant la méthode d’inoculation à l’étape 1.3.
- Souris domestiques ayant subi une ou deux infections bactériennes et virales avec le même groupe d’infection et séparées des autres groupes.