Traitement des tissus infectés pour l’énumération bactérienne dans un modèle de co-infection chez la souris

Résumé

Source : Lenhard, A., et al. Un modèle murin pour la transition de Streptococcus pneumoniae de colonisateur à agent pathogène après une co-infection virale récapitule une maladie aggravée par l’âge. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo montre le traitement des poumons chez une souris co-infectée par une bactérie pathogène et un virus. Le triturage, l’homogénéisation et le plaquage du tissu pulmonaire permettent de quantifier la charge bactérienne, ce qui indique la propagation bactérienne aux poumons et la gravité de la maladie.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Traitement des tissus infectés pour l’énumération bactérienne

1. Collection pulmonaire
   1. À l’aide de ciseaux de dissection, faites une découpe sur les côtés de la cage thoracique exposée et tirez doucement les côtes vers la tête de la souris pour exposer le cœur. Insérez une aiguille de 25 G fixée à une seringue de 10 mL préremplie de solution physiologique tamponnée phosphate (PBS) dans le ventricule droit et commencez à perfuser lentement. Cherchez un blanchiment des poumons comme indicateur d’une perfusion réussie. Rince lentement pour éviter de casser le tissu pulmonaire.
   2. Soulève le cœur avec la pince et fais une coupe pour séparer les poumons et le cœur. Une fois séparés, ramassez tous les lobes du poumon avec la pince et rincez dans un plat contenant du PBS stérile pour éliminer tout sang résiduel. Dans une boîte de Petri, hachez les poumons en petits morceaux et mélangez bien. Retirez la moitié du mélange pulmonaire pour déterminer les unités formatrices de colonies bactériennes (UFC) ou les unités formatrices de plaques virales (PFU) et placez-la dans un tube à fond rond de 15 mL prérempli de 0,5 mL de PBS pour homogénéisation.
      REMARQUE : Il est important de ne pas prendre différents lobes du même poumon pour les différentes évaluations. Au lieu de cela, tous les lobes devraient être mincés, bien mélangés ensemble, et répartis également pour les différentes évaluations.
2. Pour homogénéiser le tissu collecté, il faut d’abord nettoyer la sonde homogénéisatrice en la mettant dans 70 % d’éthanol et en allumant l’homogénéiseur à 60 % de puissance pendant 30 secondes. Répétez l’étape dans de l’eau stérile pendant 10 secondes. Homogénéisez chaque tissu pendant 1 minute. Nettoyez la sonde homogénéisante dans de l’eau stérile entre chaque échantillon et dans un tube frais à 70 % d’éthanol entre chaque organe et groupe échantillon.
3. Énumération des nombres bactériens
   1. Une fois tous les organes prélevés et homogénéisés, les plaques sont diluées en série sur les plaques d’agar sanguin. Pour calculer l’UFC total, utilisez 10 μL pour plaquer et notez le volume final en mL pour chaque échantillon. Incubez toute la nuit à 37 °C/5 % de CO₂.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringues jetables BD avec embouts Luer-Lok (1 mL)	Fisher	14-823-30
Ciseaux délicats à dissection Fisherbrand	Fisher	08-951-5	Instruments utilisés pour la récolte
Fisherbrand disséquant les pinces tissulaires	Fisher	13-812-38	Pinces pour la récolte
Seringues stériles Fisherbrand à usage unique (10 mL)	Fisher	14-955-459