Préparation d’une culture bactérienne du sol pour une infection bactériophage

Résumé

Source : Cross, T., et al., Une technique d’enrichissement optimisée pour l’isolement des espèces de bactériophages arthrobacters à partir d’isolats d’échantillons de sol. J. Vis. Exp.(2015)

Cette vidéo montre la préparation d’une culture bactérienne pour la production de bactériophages. Il couvre les étapes d’inoculation d’une bactérie du sol dans une fiole déflectée, la promotion d’une croissance uniforme par aération et secouement, et la surveillance de la densité cellulaire à l’aide de mesures optiques de densité. Une fois que la culture atteint la phase optimale de croissance, elle est prête à produire efficacement des bactériophages.

Protocole

Préparation des cellules d’arthrobacter pour l’isolement des phages

• Culture Arthrobacter sp. Des colonies KY3901 striées sur une plaque agar Luria Bertani (LB) incubées à 30 °C pendant 2 à 3 jours. Choisissez une colonie et utilisez une boucle stérile pour l’ajouter à 250 ml de bouillon LB dans un flasque de culture défêlant, puis incubez-la dans un incubateur secouant à 225 tr/min à 30 °C.
• Laisser environ 24 heures de croissance pour obtenir des cellules de phase exponentielle tardive/stationnaire précoce pour des expériences d’infection par phages. Surveillez de près l’état de croissance bactérienne afin d’empêcher les cellules d’entrer dans l’état de croissance stationnaire moyen à tardif.
  REMARQUE : La croissance cellulaire doit consister en une densité optique OD₆₀₀ comprise entre 0,5 et 0,0,7 pour les procédures/étapes d’isolement et de purification des phages.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Poudre de bouillon LB	Fisher	BP9722-2
Agar granulé	Fisher	BP1423-2
Eppendorf Tubes	Fisher	05-408-129
Pipets individuelles de 5 ml	Fisher	13-678-11D
Tubes coniques de 50 ml	Fisher	76002844
Tubes coniques de 15 ml	Fisher	76002845
Pipets individuelles de 10 ml	Fisher	13-676-10J
25 ml de pipetes individuelles	Fisher	13-676-10K