Établir un modèle murin des infections aux brûlures avec des bactéries pathogènes

Résumé

Source : Wang, Y., et al. In Vivo Étude de la thérapie antimicrobienne par lumière bleue pour les infections multi-résistantes aux brûlures d’Acinetobacter baumannii à l’aide d’imagerie par bioluminescence. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo montre comment établir une infection par brûlure dans un modèle murin en appliquant un bloc en laiton chauffé suivi d’un inoculum bactérien pathogène. Les bactéries colonisent la matrice extracellulaire exposée et forment un biofilm, permettant des études in vivo des interactions hôte-pathogène.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Modèle murin d’infection par brûlure causée par Acinetobacter baumannii bioluminescent

1. Utilisez des femelles adultes BALB/c âgées de 7 à 8 semaines et pesant entre 17 et 19 g. Laissez les souris s’acclimater aux conditions de laboratoire pendant au moins 3 jours avant le début de l’expérience. Maintenez les souris dans un cycle clair/sombre de 12 heures à une température ambiante de 21 °C et donnez-leur nourriture et eau à volonté de façon à entendre.
2. Anesthésiez les souris par une injection intrapéritonéale d’un cocktail kétamine-xylazine (100 mg/kg-20 mg/kg). Touchez légèrement la palpèbre de chaque souris avec un coton-tige ; l’absence du réflexe palpébral suggère une profondeur anesthésique appropriée. Couvrez les yeux de la souris avec une pommade vétérinaire pour éviter qu’elle ne sèche pendant l’anesthésie.
3. Rase les souris à l’arrière pour exposer autant de peau que possible en utilisant une tondeuse à 50 lames.
4. Placez le couvercle d’une boîte de Petri de 35 mm sous l’abdomen de chaque souris pour garder leur dos relativement horizontal.
5. Faites bouillir de l’eau dans un bécher de 250 mL (à 80 % de remplissage) à l’aide d’une plaque chauffante de 10 » x 10 », 220 volts à courant alternatif (VAC). Immergez un bloc en laiton (1 cm x 1 cm de section transversale) dans le bécher jusqu’à atteindre un équilibre thermique avec l’eau. L’équilibre thermique prend généralement <5 minutes et est indiqué par la réébouillivation de l’eau dans le bécher.
6. Avant de provoquer la brûlure, administrez des analgésiques préventifs (une injection sous-cutanée de 0,1 mg/kg de buprénorphine) pour soulager la douleur.
7. Dix minutes après les analgésiques préemptifs, appuyez doucement le bloc de laiton chauffé sur la zone rasée du dos des souris pendant 7 secondes pour provoquer des brûlures.
   REMARQUE : Pour éviter les dommages thermiques au personnel de travail, portez des gants résistants à la chaleur lors de la procédure de combustion.
8. Administrez 0,5 mL de solution physiologique stérile par injection sous-cutanée pour prévenir la déshydratation.
9. Cinq minutes après l’induit de la lésion thermique, inoculez 50 μL de suspension bactérienne contenant 5 unités formatrices de colonies (UFC) de 10⁶ dans du sérum physiologique tamponné phosphate (PBS) sur les brûlures de souris à l’aide d’une pipette. Ensuite, à l’aide d’un coton-tige stérile en zigzag sur la peau, étalez les aliquotes sur les brûlures pour répartir les cellules bactériennes dans la zone brûlée aussi uniformément que possible.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Mouse	Laboratoires Charles River, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 semaines, poids 17-19 g
Acinetobacter baumannii	Centre médical militaire Brooke, Fort Sam Houston, TX	Isolat clinique	Souche luminescente modifiée
Seringues à insuline	Fisher Scientific	14-826-79	Seringues d’insuline BD Lo-Dose U-100 pour injection
Chlorure de sodium	Fisher Scientific	721016	0,9 % de chlorure de sodium
Solution séline tamponnée phosphate, solution 1x	Fisher Scientific	BP24384	Un tampon phosphate standard utilisé dans de nombreuses procédures biomoléculaires
Anneaux inoculants	Fisher Scientific	22-363-605	Pour étaler l’inoclum bactérien sur la surface brûlée de souris
Bloc en laiton	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm par 10 mm	Pour la création de brûlures chez la souris
Gants Extreme Dragon PBI/Kevlar à haute chaleur	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Gants résistants à la chaleur
Plats Greiner	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Plaque chauffante numérique Corning	Société d’instruments Cole-Parmer, LLC	UX-84301-65	10 » x 10 », 220 VAC, pour faire bouillir de l’eau
Lit chirurgical chauffé à l’eau fine de la souris/rat	Systèmes E-Z	EZ-211	Prévient la perte de chaleur et l’hypothermie pendant la chirurgie
Pommade vétérinaire	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5 %, Augensalbe	Pommade optalmique pour prévenir la sécheresse oculaire