Imagerie bioluminescente des brûlures infectées par Acinetobacter baumannii chez des souris

Résumé

Source : Wang, Y., et al. In Vivo Étude de la thérapie antimicrobienne par lumière bleue pour les infections multi-résistantes aux brûlures d’Acinetobacter baumannii à l’aide d’imagerie par bioluminescence. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo montre la procédure d’imagerie des infections de brûlures chez des souris inoculées avec Acinetobacter baumannii portant un opéron bioluminescent. Il démontre comment l’oxydation du substrat catalysée par la luciférase produit une lumière proportionnelle à la charge bactérienne, permettant un suivi en temps réel de la progression de l’infection à l’aide d’un système d’imagerie par bioluminescence.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Imagerie par bioluminescence des infections chez la souris

1. Imagez les souris à l’aide d’un système d’imagerie en faible luminosité comprenant une caméra à charge couplée intensif, un contrôleur de caméra, une chambre d’échantillons et un processeur d’image.
2. Anesthésiez les souris avec une injection intrapéritonéale d’un cocktail kétamine-xylazine (100 mg/kg - 20 mg/kg). Touchez légèrement le palpebral des souris avec un coton-tige ; l’absence du réflexe palpébral suggère une profondeur anesthésique appropriée.
3. Lance le logiciel d’imagerie en direct. Dans le panneau de configuration qui apparaît, cliquez sur Initialiser. Attendez que la couleur de la boîte de température devienne verte, indiquant que la température de l’étage dans la chambre de l’échantillon a atteint 37 °C.
4. Placez les souris sur la scène (37 °C) dans la chambre des échantillons du système d’imagerie, les brûlures infectées étant directement sous la caméra.
   REMARQUE : La bioluminescence des bactéries pourrait diminuer lorsque les brûlures deviennent sèches. Il est donc recommandé d’hydrater les brûlures de souris avec du PBS avant l’imagerie.
5. Dans le panneau de contrôle, cochez à côté de « Luminescence ». Sélectionnez « Exposition automatique » afin que le temps d’exposition pour l’imagerie soit optimisé par le logiciel d’imagerie en direct en fonction de l’intensité de bioluminescence.
6. Sélectionnez « C » dans la liste déroulante « Champ de vision ». Sélectionnez l’option « Scanner les médiums » pour que le logiciel détermine la distance focale. Mets une coche à côté de Superposition.
7. Cliquez sur « Acquérir » pour capturer l’image. Dans la case « Modifier l’étiquette d’image », cliquez sur « OK » ; une « Fenêtre d’image » et une « Palette de péage » apparaîtront.
8. Définissez les paramètres de ROI automatique pour la sélection automatique.
9. Quantifiez l’intensité de la bioluminescence en unités de luminescence relative (RLU) et affichez la bioluminescence sur une échelle de fausse couleur allant du rose (le plus intense) au bleu (le moins intense).
10. Calculez la fraction de survie des bactéries lors des brûlures de souris à différents moments selon l’analyse de l’intensité de la bioluminescence. La fraction de survie des bactéries à un moment donné = l’intensité de bioluminescence mesurée à ce moment / l’intensité de bioluminescence mesurée juste avant l’exposition à la lumière bleue antimicrobienne.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Série III	Imagerie préclinique in vivo
LED à diode électroluminescente	VieLight Inc, Toronto, Canada	415 nm	Source lumineuse pour l’éclairage
Mouse	Laboratoires Charles River, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 semaines, poids 17-19 g
Acinetobacter baumannii	Centre médical militaire Brooke, Fort Sam Houston, TX	Isolat clinique	Souche luminescente modifiée
Plats Greiner	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm