Thérapie par lumière bleue pour les infections bactériennes résistantes aux médicaments dans les brûlures dans un modèle murin

Résumé

Source : Wang, Y., et al. Investigation in vivo de la luminothérapie bleue antimicrobienne pour les infections multi-résistantes à la brûlure d’Acinetobacter baumannii à l’aide d’imagerie par bioluminescence. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo montre la procédure pour traiter les infections de brûlures causées par des bactéries bioluminescentes et résistantes aux médicaments chez la souris à l’aide d’une thérapie par lumière bleue, suivie d’imagerie par bioluminescence pour surveiller l’efficacité du traitement.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Thérapie antimicrobienne par lumière bleue pour l’infection à A. baumannii chez la souris

1. Anesthésiez les souris avec une injection intrapéritonéale d’un cocktail kétamine-xylazine (100 mg/kg - 20 mg/kg). L’absence du réflexe palpébral suggère une profondeur anesthésiante appropriée.
2. Divisez aléatoirement les souris en un groupe traité par aBL (n = 10) et un groupe témoin non traité (n = 10).
3. Pour le groupe traité à la lumière bleue antimicrobienne (aBL), couvrir les yeux de la souris avec du papier aluminium pour éviter une surexposition à la lumière. Placez les brûlures de souris directement sous la diode électroluminescente (LED), avec le couvercle d’une boîte de Petri de 35 mm sous l’abdomen de la souris pour maintenir leur dos horizontal.
4. Remplacez la jauge de puissance/énergie mentionnée à l’étape 3.5 par une souris sur une boîte de Petri carrée. Ajustez la hauteur de la souris à une position où la distance entre l’ouverture de la LED et la surface de la brûlure de la souris soit égale à celle entre l’ouverture de la LED et le niveau du capteur lumineux du compteur de puissance/énergie.
5. Irradiez les brûlures infectées à une irradiance de 100 mW/^cm2. Administrez l’aBL à des doses de 72 J/^{cm 2} jusqu’à atteindre une dose totale de 360 J/^{cm 2} (par exemple 0, 72, 144, 216, 288 et 360 J/^{cm 2}). Après chaque dose lumineuse, effectuez une imagerie bioluminescente pour les souris.
6. Pour le groupe témoin non traité, effectuer l’imagerie bioluminescente des brûlures de souris, en utilisant les mêmes intervalles de temps que pour le groupe traité à l’aBL.
7. Avant la convalescence des souris, placez-les sur le lit chirurgical chauffé à l’eau pour éviter la perte de chaleur et l’hypothermie. Observez l’activité et le réflexe palpébral des souris jusqu’à leur rétablissement. Après la récupération des souris, hébergez-les 2 à 3 par cage.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Série III	Imagerie préclinique in vivo
LED à diode électroluminescente	VieLight Inc, Toronto, Canada	415 nm	Source lumineuse pour l’éclairage
Compteur de puissance/énergie	Thorlabs, Inc., Newton, NJ	PM100D	Détecteur d’irradiance lumineuse
Mouse	Laboratoires Charles River, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 semaines, poids 17-19 g
Acinetobacter baumannii	Centre médical militaire Brooke, Fort Sam Houston, TX	Isolat clinique	Souche luminescente modifiée
Solution séline tamponnée au phosphate, solution 1x	Fisher Scientific	BP24384	Un tampon phosphate standard utilisé dans de nombreuses procédures biomoléculaires
Pointes de pipet Fisher Scientific Redi-Tip, 1-200 μL	Fisher Scientific	02-707-502	Embouts de pipet
Bloc en laiton	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm par 10 mm	Pour la création de brûlures chez la souris
Gants Extreme Dragon PBI/Kevlar à haute chaleur	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Gants résistants à la chaleur
Plats Greiner	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Plaque chauffante numérique Corning	Société d’instruments Cole-Parmer, LLC	UX-84301-65	10 » x 10 », 220 VAC, pour faire bouillir de l’eau
Lit chirurgical chauffé à l’eau Souris/Rat Thin Line	Systèmes E-Z	EZ-211	Prévient la perte de chaleur et l’hypothermie pendant la chirurgie
Pommade vétérinaire	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5 %, Augensalbe	Pommade optalmique pour prévenir la sécheresse oculaire