Visualisation du stress oxydatif induit par un pathogène chez C. elegans à l’aide de SKN-1 marqué GFP

Abstract

Source : Naji, A., et al. Étude du stress oxydatif causé par les streptocoques du groupe Mitis chez Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo démontre l’utilisation de SKN-1 marqué par une protéine fluorescente verte chez C. elegans pour surveiller le stress oxydatif en suivant la fluorescence verte. Les vers exposés à S. gordonii présentent une forte fluorescence nucléaire, confirmant un stress induit par les agents pathogènes, tandis que ceux nourris avec E. coli présentent une fluorescence verte diffuse dans le cytoplasme, indiquant une activation minimale de SKN-1.

Protocol

1. Observation de la localisation du SKN-1 en réponse à l’infection par Streptococcus gordonii

1. Ajouter ~100 larves L4 à chaque extrait de levure Todd–Hewitt (THY) ensemencé avec Streptococcus et à chaque plateau d’agar du milieu de croissance nématode (NGM) ensemencé d’Escherichia coli (E. coli). Utilisez trois plaques par souche de bactérie. Incubez les plaques pendant 2 à 3 heures à 25 °C.
2. Ensuite, retirez les plaques de l’incubateur, lavez-les avec un tampon M9 modifié (M9W), et collectez les vers dans des tubes coniques de 15 mL.
3. Lavez les....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Médias et produits chimiques
BD Bacto bouillon Todd Hewitt	Fisher Scientific	DF0492-17-6
Tubes centrifugeuses stériles coniques en polypropylène de 15 mL	Fisher Scientific	12-565-269
Azidée de sodium	Sigma Aldrich	S2002-25G
Chlorhydrate de tétramisole	Sigma Aldrich	L9756
Coulisses de couvercle n°1.5 18 mm x 18 mm	Fisher Scientific	12-541A
Agarose	Sigma Aldrich	A9539-50G
LD002	IdIs1	SKN-1B/C :GFP + rol-6(su1006)	Keith Blackwell