Essai à base de fluorescence pour étudier les interactions des récepteurs des macrophages avec les antigènes bactériens

Résumé

Source : Barbero, A. M., et.al. Analyses de fluorescence pour l’étude de l’interaction de Mycobacterium tuberculosis avec le récepteur immunitaire SLAMF1. J. Vis. Exp. ( (2025)

Cette vidéo présente un test basé sur la fluorescence pour étudier l’interaction entre un récepteur macrophage et les antigènes Mycobacterium tuberculosis . Les antigènes marqués fluorescentement sur une couche de couverture sont incubés avec des extraits de protéiques de macrophages, réticulés, marqués par anticorps, et visualisés par des signaux de fluorescence qui se chevauchent.

Protocole

1. Interaction entre Mycobacterium tuberculosis et SLAMF1 par microscopie à fluorescence

1. Réticulation bactérie-protéine
   1. Introduisez des cache-toits ronds de 12 mm dans des plaques de culture à 24 puits (1 engourdi par puits) à l’aide d’une pince chirurgicale à nez rond.
      REMARQUE : Nettoyez soigneusement les bâtons de couverture avec de l’éthanol à 70 %. Si désiré, ils peuvent être autoclavés ou stérilisés sous lumière UV pendant 30 minutes.
   2. Incubez la couche de couverture avec 400 μL de 10 μg/mL de poly-D-Lysine toute la nuit à 4 °C. C....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Anticorps secondaire Alexa Fluor 488	Invitrogen	A21121	Pour la microscopie à fluorescence
Anticorps primaire anti-SLAMF1	BioLegend	306302	Pour la microscopie à fluorescence
Aqua-Poly/Mount	Polysciences	18606-20	Supports de montage
Gaines de couverture 12mm	HDA	-	Pour l’analyse d’interaction par microscopie
EGS	ThermoFisher Scientific	21565	Pour le traitement par réticulation
Formaldéhyde	Merck	K47740803613	Pour le traitement par réticulation
Lames en verre	Glass Klass	-	Pour l’analyse d’interaction par microscopie
Glycine	Sigma	G8898	Pour le traitement par réticulation
Imager.A2	Carl Zeiss	430005-9901-000	Microscope à fluorescence avec module d’illumination Colibri 7
Poly-D-lysine	Sigma Aldrich	A-003-M	Pour le traitement des couvertures
Rhodamine B	Sigma Aldrich	21955	Pour M. Coloration de la tuberculose