Surveillance de la colonisation bactérienne des racines d’Arabidopsis thaliana dans un système sans sol

Dans cet article

Résumé

Source : Harris, S. L., et al. Surveillance de la colonisation bactérienne et de l’entretien des racines d’Arabidopsis thaliana dans un système hydroponique flottant. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo démontre un protocole pour surveiller la colonisation de bactéries associées aux racines sur des semis d’Arabidopsis thaliana cultivés dans un système sans sol. Après la colonisation, les bactéries sont déplacées par sonication, puis diluées, placées et incubées pour former des colonies reflétant l’attachement et la viabilité bactériennes.

Protocole

Collecte de bactéries pour le comptage cellulaire viable

REMARQUE : Le nombre de bactéries par racine de semis peut être déterminé à n’importe quel moment d’incubation. La colonisation peut être suivie entre 0 h et 18 h, tandis que l’entretien peut être suivi à partir de 18 h.

Retirez les semis du maillage (Figure 1, étape 5). Placez doucement des pinces stérilisées à la flamme sous les feuilles (mais du côté feuille de la treillette), et pincez légèrement la tige. Remontez les semis et éloignez-les du grillage pour déloger la racine sans la casser. Si la racine casse, grattez doucement le dessous du maillage pour en récupérer toute la longueur.
Éliminez les bactéries des racines des plantes. Transférer les bactéries dans des puits d’une plaque à 24 puits contenant 1 mL de_{ddH 20}. Sonicez les échantillons.
Quantifiez les bactéries sur les racines.
1. Effectuer des dilutions sérielles de 10 fois des échantillons soniés jusqu’à une dilution de 10 ^{à 6} dans un milieu de croissance bactérien. Ajoutez 50 μL de chaque dilution sur des plaques d’agar individuelles et étalez avec des billes de verre stériles. Incubez les plaques à la température optimale pour les bactéries jusqu’à ce que les colonies individuelles soient dénombrables.

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Résultats

Figure 1 : Analyse de colonisation bactérienne et d’entretien sur les racines d’A. thaliana . Les semis d’A. thaliana cultivés sur un maillage plastique stérilisé ont été transférés dans un milieu de croissance optimisé pour les b...