Photoblanchiment des pigments cyanobactériens pour l’imagerie des protéines régulant la croissance

Résumé

Source : Zhan, Y., et al. Le photoblanchiment permet l’imagerie à super-résolution de l’anneau FtsZ chez la Cyanobactérie Prochlorococcus. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo illustre la procédure de photoblanchiment des pigments dans les cellules cyanobactériennes en utilisant la lumière xénon dans des conditions froides afin d’améliorer l’imagerie de fluorescence des protéines régulant la croissance.

Protocole

1. Photoblanchiment des pigments de chlorophylle en étape de blocage

1. Transfère la gaine de couverture sur le bol de teinture. Ajoutez 50 μL de tampon de blocage, qui contient 0,2 % (v/v) de détergent non ionique à 100 et 3 % (v/v) de sérum de chèvre, sur le dessus de la housse.
2. Placez toute la plaque de coloration sur de la glace et déplacez-la sous la source lumineuse au xénon pour le photoblanchiment pendant au moins 60 minutes, avec une intensité lumineuse de 1 800 μmol photons/^{m 2}·s.
3. Après photoblanchiment et blocage, retirez soigneusement le tampon de blocage en l’absorbant avec le bord d’un essuie-tout.
   REMARQUE : L’intensité de la lumière xénon est si élevée qu’il faut de vraies lunettes de soleil pour la protection oculaire. Entre-temps, enveloppez la source lumineuse et la plaque avec du papier aluminium pour éviter toute fuite de lumière, qui pourrait causer des dommages oculaires. Vérifiez la planche toutes les 15 minutes pour vous assurer qu’elle reste humide. Si c’est sec, ajoutez 50 μL de tampon de blocage.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Particules de polystyrène	Spherotech	PP-20-10	2,0-2,4 μm
Couverture	Marienfeld	111580	18 mm ∅, Épaisseur n° 1
Éthanol	Scharlau	ET00021000
Poly-L-lysine hydrobromure	Sigma-Aldrich	P9155	Poids mol 70 000-150 000
Paraformélélidoïde	Sigma-Aldrich	158127
Solution glutaraldéhyde, 50 %	Sigma-Aldrich	340855
PBS	Sigma	P3813
Triton X-100	Sigma	T8787
EDTA Sel Désodique, 2-hydrate	Biotechnologie de l’or	E-210-500
Base de Trizma	Sigma	T1503
Lysozyme	Sigma	L6876
Sérum de chèvre	Sigma	G9023
Source lumineuse XD-300 au xénon			250 W