Détection de la susceptibilité aux antibiotiques bactériens à l’aide d’un microscope à diffusion Raman stimulée

Résumé

Source : Zhang, M. et al., Tests rapides de susceptibilité antimicrobienne par imagerie par diffusion Raman stimulée de l’incorporation de deutérium dans une seule bactérie. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo démontre l’application de la microscopie à diffusion Raman stimulée pour évaluer la susceptibilité aux antibiotiques en suivant l’activité métabolique marquée au deutérium. En surveillant les signaux carbone-deutérium, la méthode permet la détection rapide de populations bactériennes résistantes et sensibles.

Protocole

1. D₂Traitement d’incorporation O en présence d’antibiotiques (Figure 1a)

1. Vérifiez la concentration bactérienne en mesurant la densité optique (OD) avec un photomètre à une longueur d’onde de 600 nm.
2. Diluez la solution bactérienne à l’aide du milieu normal pour le bouillon Mueller-Hinton (MHB), qui ne contient pas de deutérium, pour atteindre une concentration cellulaire finale de 8 x 10⁵ UFC/mL. Vortex doucement pour mélanger les cellules bactériennes.
3. Préparez 300 μL d’aliquotes de la solution bactérienne dans sept microtubes de 1,5 mL, et 600 μL d’aliquotes de la solution bactérienne dans un microtube de....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Modulation acusto-optique	Gooch&Housego	R15180-1.06-LTD	Modulation du faisceau laser Stokes
Amoxicilline	Sigma Aldrich	A8523-5G
Filtre passe-bande	Chroma	HQ825/150m	Bloquez le faisceau laser Stokes avant la photodiode
Chlorure de calcium	Sigma Aldrich	C1016-100G	Réglage des cations
Bouillon Mueller-Hinton ajusté par les cations	Fisher Scientific	B12322	Test de sensibilité antimicrobienne des micro-organismes par des méthodes de dilution du bouillon
Centrifugeuse	Thermo Scientific	75002542
Lunettes de couverture	VWR	16004-318
Tube de culture avec capuchon à boutons	Marque Fisher	149569B
Oxyde de deutérium		151882	Solvant organique pour dissoudre les antibiotiques
Oxyde de deutérium-D6	Sigma Aldrich	156914	Solvant organique comme norme pour calibrer le système d’imagerie SRS
Escherichia coli BW 25113	Le Centre de Patrimoine Génétique de Coli	7636
Tubes microcentrifugeuses en polypropylène Eppendorf 1,5 mL	Marque Fisher	05-408-129
Sulfate de gentamicine	Sigma Aldrich	G4918
Filtres hydrophiles au polyvinylidène fluorure	Millipore-Sigma	SLSV025NB	Taille des pores : 5 μm
Laser pulsé femtoseconde InSight DeepSee	Spectra-Physique	Modèle : insight X3	Source laser accordable et source laser fixe à 1045 nm pour l’imagerie SRS
Amplificateur verrouillé	Zurich Instrument	HF2LI	Démoduler les signaux SRS
Condenseur d’huile	Olympe	U-AAC	NA 1.4
Pseudomonas aeruginosa ATCC 47085 (PAO1)	Collection de la culture de type américain	ATCC 47085
Photodiode	Hamamatsu	S3994-01	Détecteur
Tube conique en polypropylène 15 mL	Faucon	14-959-53A
Filtres à polypropylène	Thermo Scientific	726-2520	Taille des pores 0,2 μm
Plaques de Petri stériles	Corning	07-202-031
Seringue 10 mL	Marque Fisher	14955459
Spectrophotomètre UV/Vis	Beckman Coulter	Modèle : DU 530	Mesure de la densité optique à une longueur d’onde de 600 nm
Mélangeur vortex	VWR	97043-562
Objectif de l’eau	Olympe	UPLANAPO/IR	60×, NA 1,2