Établissement d’une infection bactérienne chez les larves de Drosophila

Dans cet article

Résumé

Source : Hiroyasu, A., D et al., Extraction d’hémocytes de larves de Drosophila melanogaster pour infection microbienne et analyse. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo montre la procédure pour établir une infection bactérienne chez les larves de Drosophila en les plaçant dans une gouttelette bactérienne et en les piquant avec une aiguille en tungstène. Les larves sont ensuite incubées sur une plaque agar rainurée et riche en nutriments pour étudier les interactions hôte-pathogène.

Protocole

1. Infection in vivo

Réchauffez l’assiette d’agar de jus de fruit Drosophila à température ambiante pendant 15 minutes.
1. Ajoutez 30 g d’agar à 700 mL d’eau et faites un autoclave pendant 40 minutes.
2. Dissoudre 0,5 g de méthylparabène dans 10 mL d’éthanol absolu.
3. Ajoutez la solution de méthyl parabène à 300 mL de concentré de jus de fruits.
4. Mélangez rapidement le concentré de jus dans la solution d’agar autoclavée et distribuez 5 mL dans des boîtes de Petri de 10 × 35 mm.
5. Après que les assiettes ont refroidi pendant 15 minutes, conservez-les à 4 °C.
Préparez les larves du 3e stade.
Placez la pâte de levure sur une plaque d’agar. Effectuer une découpe fine dans la plaque d’agar où les larves peuvent migrer pour éviter le séchage (Figure 1A). Assemblez une aiguille pointue en tungstène de 0,001 mm avec des pinces de maintien à l’aide d’un film de paraffine (Figure 1B, C).
Pipettez 50 μL de Coxiella burnetii expressive à haute titrage mCherry (5,95×10⁹ GE/mL) sur le film de paraffine sous le stéréoscope et placez les larves dans la piscine de bactéries.
Placez les larves dans la piscine de bactéries, piquez-les avec une aiguille de tungstène (Figure 3D), puis transférez-les sur une plaque d’agar (Figure 1E).
Transférez le milieu pathogène restant sur la plaque d’agar et scellez la plaque avec un film de paraffine.
Gardez les larves sur l’assiette dans l’air humide jusqu’au moment souhaité après l’infection (Figure 1F). Dans cette expérience, des larves infectées par C. burnetii restent sur la plaque pendant 24 heures.

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Résultats

Figure 1 : Infection in vivo. A) Les assiettes d’agar de jus de fruit de Drosophila et la pâte de levure sont utilisées pour l’incubation des larves infectées in vivo . Des coupes sont faites dans la plaque d’ag...