Délivrance de gènes médiée par AAV pour la visualisation de l'altération de l'intégrité de la membrane rétinienne

Dans cet article

Résumé

Source : Vacca, O., et al. Utilisation du virus adéno-associé comme outil pour étudier les barrières rétiniennes dans les maladies. J. Vis. Exp. (2015).

Ce vidéo montre la méthode de transfert génique médiée par AAV dans une rétine de souris transgénique, suivie de la dissection et de la coloration du tissu pour évaluer l'intégrité de la membrane limitante interne.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons animaux ont été examinées et approuvées par le comité d'éthique animal approprié.

1. Immunohistochimie

Pour les montages plats de rétine (Figure 1), fixer les yeux énucléés dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant 15 min afin de faciliter la dissection.
1. En 15 à 30 min, disséquer les yeux pour enlever la cornée et le cristallin. Séparer la rétine de l'épithélium pigmentaire de la rétine (RPE) et de la sclère en coupant autour de l'ora serrata et du nerf optique. Plonger dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant encore 30 min pour fixer la rétine et la prot....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Figure 1 : Représentation schématique du protocole général. Après la production des AAV, les particules sont injectées dans le vitré ou dans la veine péniennne pour anesthésier des souris adultes. Des images du fond d’œil sont réalisées à l’.......