Ce vidéo montre l'utilisation de densovirus recombinants de moustiques codant des microARN pour inhiber l'expression de gènes spécifiques chez les larves de moustiques. Les larves jeunes infectées produisent des microARN fonctionnels qui suppriment l'expression du gène cible en vue d'études ultérieures.
Article de méthode
Silencage génique médié par un densovirus recombinant chez les larves de moustiques
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31 août 2026
Dans cet article
Résumé
Protocole
1. Transduction de moustiques
- Laver trois fois 100 larves de premier stade de Aedes albopictus à l’eau déionisée, puis transférer les larves dans un bécher contenant 95 mL d’eau déionisée. Ajouter 5 mL de stocks du densovirus recombinant d’Aedes aegypti (rAaeDV) (concentration finale de 1,00 x 1010 copies/mL).
- Incuber pendant 24 h à 28 °C, laver les larves trois fois à l’eau déionisée, puis les replacer dans les boîtes et les nourrir régulièrement.
- Surveiller le niveau d’expression du gène cible dans les larves par qPCR ou immunotransfert.
REMARQUE : La méthode de détection du signal fluorescent peut être utilisée pour isoler plus précisément les larves infectées. Par exemple, pour détecter les signaux fluorescents émis par des larves infectées par un virus recombinant exprimant DsRed, les larves peuvent être placées sur une lame creuse et observées au microscope à fluorescence inversé toutes les 8 heures jusqu’à 2 jours après l’infection. Dès que des larves fluorescentes sont détectées, elles doivent être séparées dans des gobelets plastiques individuels afin de permettre une observation continue ultérieure. Les larves présentant une infection dans plusieurs tissus peuvent être identifiées à l’aide de cette méthode.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Machine centrifuge | Thermo Scientific | 75004260 | |
| Système de centrifugation | Beckman Coulter | 363118 | |
| SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) | Beijing Tiangen Biotech | FP205 |
