Transduction d'un foie de rat humanisé à l'aide de vecteurs viraux adéno-associés

Résumé

Source : Hiller, T., et al. Étude des vecteurs viraux dans un modèle de foie tridimensionnel repeuplé avec la lignée cellulaire de carcinome hépatocellulaire humain HepG2. J. Vis. Exp., (2016)

Ce vidéo montre la livraison de gènes médiée par un virus adéno-associé dans un support de foie de rat humanisé. Le vecteur délivre un transgène codant pour un marqueur fluorescent et un ARN d'interférence génique dans les cellules hépatiques par endocytose médiée par récepteur. Ce modèle permet une transduction efficace dans un système tissulaire hépatique tridimensionnel perfusé.

Protocole

Transduction du modèle hépatique

1. Ajuster la solution de vecteur viral adéno-associé (AAV) à une concentration finale de 2,7 x 10¹³ génomes de vecteur dans 5 ml en ajoutant le volume approprié de solution tampon phosphate (PBS).
2. Déconnecter le foie du circuit de milieu en retirant le tube de la canule. Relier une seringue de 5 ml à la canule de la veine porte et injecter intégralement la solution de vecteur AAV (5 ml).
3. REMARQUE : Éventuellement, ajouter du rouge de phénol (5 µg/ml) afin de suivre la distribution de la solution de vecteur AAV dans tout le foie.
4. Incuber pendant 1 h sans pompage. Augmenter progressivement le débit, en commençant par 1,25 ml/min pendant 10 min, puis 2,5 ml/min pendant 20 min et 3,75 ml/min pendant 30 min. Cultiver le foie de rat recellulaire pendant 6 jours.
5. REMARQUE : Remplacer un tiers du milieu par du milieu frais (50 ml) tous les deux jours. Prélever des échantillons du milieu de culture pour mesurer les paramètres physiologiques, tels que l'activité de la lactate déshydrogénase, le pH des échantillons de milieu, ainsi que la concentration en glucose et en lactate.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Incubateur	Fraunhofer	/
Pompe péristaltique	Fraunhofer	/
Brande à gorge	Duran	2439454
Joint torique transparent	Duran	2922551
Collier de serrage rapide	Duran	2907151
Couvercle de bride plat	Duran	2429857
Tuyau fileté	Duran	2483802
Tuyau fileté	Duran	2483602
Joint d'étanchéité en silicone	Duran	2862012
Bouchon fileté	Duran	2924013
Bouchon fileté	Duran	2924008
Bouchon fileté avec orifice	Duran	2922709
Bouchon fileté avec orifice	Duran	2922705
Filtre	Sarstedt	831,826,001
Tuyau en silicone	VWR	228-1500
Connecteur de tube	Ismatec	ISM556A
Tuyau biocompatible	Ismatec	SC0736
Flacons de culture T175	Greiner bio-one	660 160
RPMI 1640	BioWest SAS (Th. Geyer)	L0501-500
glutamine	BioWest SAS (Th. Geyer)	X0551-100
Trypsine	BioWest SAS (Th. Geyer)	L0940-100
pénicilline/streptomycine	BioWest SAS (Th. Geyer)	L0022-100
Sérum de veau fœtal	cc pro	S-10-M
HepG2	DSMZ	ACC 180