Infection intranasale par le herpèsvirus murin chez la souris pour évaluer les réponses immunitaires de l'hôte

Résumé

Source : Zhang, J., et al. P. Analyse de la signalisation immunitaire innée dans l'évasion virale de la production de cytokines. J. Vis. Exp. (2014)

Ce vidéo montre l'administration intranasale de l'herpèsvirus murin chez la souris afin d'induire une réponse immunitaire spécifique du poumon. Le tissu pulmonaire est ensuite traité pour obtenir des surnageants contenant des cytokines, destinés à l'évaluation ultérieure des réponses immunitaires de l'hôte.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux d'institution et par le comité de révision vétérinaire de JoVE.

1. Sécrétion de cytokines par ELISA chez des souris infectées par le γHV68

1. Anesthésiez des souris C57BL/6 (B6) appariées par sexe, âgées de 6 à 8 semaines (8-12 souris/groupe), en injectant par voie intrapéritonéale 1,5 mg de kétamine/0,12 mg de xylazine, puis inoculez par voie intranasale 40 UFP (unité formant des plaques) de γHV68 dans 40 µl. À différents moments après l'infection, euthanasiez les souris par inhalation de CO₂, suivie d'une dislocation cervicale.
2. Ouvrez la cage thoracique par une incision latérale gauche le long du sternum et sectionnez les côtes à l’aide de ciseaux pointus. Prélèvez les tissus pulmonaires.
3. Prélèvez la moitié du tissu pulmonaire (lobe gauche) dans des tubes stériles de 1,5 ml à visser contenant 500 µl de billes de zircone/silice de 1,0 mm. Ajoutez 1 ml de DMEM (milieu de Dulbecco modifié par Eagle) froid sans sérum dans le tube et homogénéisez le tissu pulmonaire par battement avec les billes pendant 30 secondes. Refroidissez les tubes sur de la glace pendant 2 minutes et répétez ce processus une fois.
4. Centrifugez les tubes (15 000 x g pendant 10 min) à 4 °C, récupérez le surnageant et mesurez la production de cytokines comme décrit ci-dessous.
5. Quantifiez les cytokines à l’aide de kits ELISA (dosage immunoenzymatique) commerciaux spécifiques aux cytokines, conformément aux instructions du fabricant.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Kits ELISA pour CCL5 murin	R&D Systems	DY478
Billes de zircone/silice de 1,0 mm	BioSpec Products	11079110z