Visualisation des nanoparticules du virus de l'hépatite E par microscopie électronique à transmission

Résumé

Source : Chen, C. C., et al. Fonctionnalisation de surface de nanoparticules du virus de l'hépatite E par des méthodes de conjugaison chimique. J. Vis. Exp. (2018)

Ce vidéo montre la préparation et la coloration négative de nanoparticules pseudovirales du virus de l'hépatite E pour leur visualisation par microscopie électronique en transmission. La méthode met en évidence l'intégrité structurale de particules capsidiques auto-assemblées, confirmant leur uniformité et leur pureté grâce à une imagerie haute résolution.

Protocole

1. Observation des nanoparticules du virus de l'hépatite E (HEVNPs) à l'aide d'un microscope électronique en transmission (TEM)
   1. Préparer ou diluer les échantillons de HEVNP à 0,5 - 2 mg/mL avec de l'acide 2-(N-morpholino)éthanesulfonique (MES) 10 mM, pH 6,2, pour l'imagerie en TEM.
   2. Ioniser les grilles recouvertes de carbone par décharge au glow à 40 mA pendant 30 s afin d'obtenir une surface de carbone hydrophile. L'équipement de décharge au glow est décrit dans le tableau des matériaux.
      REMARQUE : La surface de carbone hydrophile des grilles ne reste efficace que pendant 30 min après le traitement par décharge au glow.
   3. Tenir la grille avec des pinces et ajouter 2 µL d'échantillon de HEVNP sur la grille, attendre 15 - 30 s, puis éponger avec du papier filtre.
   4. Laver immédiatement la grille avec de l'eau ddH₂0 et éponger avec du papier filtre.
   5. Ajouter immédiatement 2 µL d'acétate d'urayle à 2 % sur la grille, attendre 15 s, puis éponger avec du papier filtre. Sécher les grilles d'échantillons en les plaçant dans une armoire électronique déshumidifiante pendant la nuit.
   6. Transférer la grille dans un microscope électronique en transmission (TEM) et acquérir des images à un grossissement de 10 000 à 80 000. Les HEVNPs apparaissent en TEM comme des protéines vides de forme icosaédrique d'environ 27 nm de diamètre, en raison de l'absence d'ARN viral.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
MES hydraté	Sigma-Aldrich Chemical Co	M8250-250G	MES
Dispositif de traitement par décharge lumineuse EMS	Electron Microscopy Science		dispositif de décharge lumineuse