Une démonstration de la fabrication et l'utilisation d'une électrode extracellulaire aspiration utilisés pour mesurer des enregistrements électrophysiologiques des cordons de rongeur néonatal épinière In vitro
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Article de méthode
La moelle épinière électrophysiologie II: fabrication des électrodes extracellulaires d'aspiration
Dans cet article
Résumé
Résumé
Développement des circuits de neurones et la locomotion peut être étudiée à l'aide de la moelle épinière des rongeurs néonatale centrale générateur de pattern (CPG) de comportement. Nous démontrons une méthode pour fabriquer des électrodes d'aspiration qui sont utilisés pour examiner l'activité CPG, ou de la locomotion fictive, dans les cordons de rongeurs disséqué épinière. Les cordons de rongeurs épinière sont placés dans le liquide céphalorachidien artificiel et les racines ventrales sont entraînés dans l'électrode d'aspiration. L'électrode est construit en modifiant une électrode d'aspiration disponible commercialement. Un fil plus lourd argent est utilisé au lieu du fil standard donné par l'électrode disponibles commercialement. La pointe de verre sur l'électrode commercial est remplacé par un embout en plastique pour une durabilité accrue. Nous préparons la main électrodes dessinés et fabriqués à partir d'électrodes spécifiques tailles de tubes, ce qui permet la cohérence et la reproductibilité. Les données sont recueillies au moyen d'un amplificateur et un logiciel d'acquisition neurogram. Les enregistrements sont effectués sur une table de l'air intérieur d'une cage de Faraday pour éviter les interférences électriques et mécaniques, respectivement.
Protocole
Enregistrements électrophysiologiques de la moelle épinière isolée peut révéler des changements génétiques et développementales de neurones de circuits 1. Nous avons précédemment démontré une méthode de disséquer les cordons de souris néonatales vertébrale 2. Nous présentons ici une méthode pour préparer les électrodes d'aspiration utile dans l'enregistrement de locomotion fictive dans les régions isolées de la moelle épinière 3.
La pointe d'une électrode de tubes en plastique peuvent être tirées d'une pointe très fine à la main en utilisant une lampe à alcool à basse température 3-5. Le tube de....
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Discussion
Développement du système nerveux peut être étudiée en utilisant des cordons rongeurs isolés épinière. En présence de neurotransmetteurs, la locomotion fictive peut être généré à partir de la moelle épinière dans la forme de motifs activité électrique 1,3. Ces bouffées rythmiques sont produites à 0,2 à 0,5 Hz et sont modelés en alternances gauche-droite et fléchisseurs-extenseurs. A différents stades de développement, la robustesse et les modèles de cette activité varie 1. Les mutations génétiques p.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Samuel L. Pfaff est un professeur dans les laboratoires de l'expression génique au Salk Institute for Biological Studies et un chercheur à l'Institut médical Howard Hughes. Ce travail a été soutenu par la Christopher Reeve et Dana Foundation. Joe Belcovson, Kent et Mike Sullivan Schnoeker de Ressources Multimédia à l'Institut Salk a fourni une aide à la photographie et l'édition.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Tuyau en PTFE à paroi fine (petit tuyau) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” d'épaisseur (petites pièces). Également disponible de 0.003” à 0.006” |
| Grand tuyau (0,86 mm (0,34”)) | BD Biosciences | 427420 | 0,86 mm (0,34”) de diamètre extérieur, 1,27 mm (0,050”) |
| Corps de l'électrode | A-M Systems | 573000 | |
| Adhésif | JB Weld | ||
| Adhésif : mastic au silicone | |||
| Étain à souder et fer à souder | |||
| Eau de Javel | |||
| Xylène | |||
| Fil d'argent : 0,010” | A-M Systems | ||
| Épingles pour insectes : Austerlitz 0,1 mm | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Support magnétique | Narishige International | GJ-8 | |
| Micromanipulateur | Narishige International | MN 151 | |
| Miniboard (tête d'amplification) | Grass Technologies | F-15EB/B1 | |
| Unité adaptateur Polyview | Grass Technologies | PVA 8 | |
| Système amplificateur bipolaire portable Physiodata | Grass Technologies | 15LT | |
| CARTE ANALOGIQUE À NUMÉRIQUE | National Instruments | 6035E | |
| Table anti-vibrations ; Vibraplane | Kinetic Systems |
Références
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
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Réimpressions et autorisations
