Caractérisation des isolés, ventilés et instrumentés poumons de souris perfusées avec un flux pulsatile

Résumé

Le protocole suivant décrit le processus d'isolement, de ventilation et d'instrumenter les poumons de souris pour mesurer stable ou pulsatile vasculaire pulmonaire pression-débit des relations afin de quantifier les effets de la circulation sanguine, circulation de l'air, les changements des voies aériennes et sur les modifications vasculaires postcharge ventriculaire droite.

Résumé

Les isolés, ventilés et instrumentés préparation des poumons de souris permet constante et pulsatile vasculaire pulmonaire pression-débit relations pour être mesurée avec un contrôle indépendant sur le débit artériel pulmonaire, forme d'onde de débit, pression des voies aériennes et de la pression auriculaire gauche. La résistance vasculaire pulmonaire est calculé en fonction multi-point, une pression constante des flux courbes; impédance vasculaire pulmonaire est calculée à partir pulsatile pression-débit courbes obtenues lors d'une gamme de fréquences. Comme maintenant reconnu cliniquement, l'impédance est une mesure supérieure de la postcharge ventriculaire droite que la résistance parce qu'il inclut les effets de la compliance vasculaire, qui ne sont pas négligeables, en particulier dans la circulation pulmonaire. Trois paramètres importants de l'impédance - le zéro hertz impédance Z _0, l'impédance caractéristique Z, _C et l'indice de réflexion des ondes R _W - donnent un aperçu de distale artérielle transversale superficie disponible pour l'écoulement, la rigidité artérielle proximale et l'impédance amont-aval décalage, respectivement. Tous les résultats obtenus dans les régions isolées, ventilées et perfusées poumons sont indépendants de ton système nerveux sympathique, l'état du volume et les effets de l'anesthésie. Nous avons utilisé cette technique pour quantifier l'impact de l'embolie pulmonaire et de l'hypoxie chronique sur la résistance et l'impédance, et de différencier les sites d'action (c.-à-proximale distale vs) d'agents vasoactifs et de la maladie en utilisant la pression de la dépendance de Z _C. En outre, lorsque ces techniques sont utilisées avec les poumons des souches génétiquement modifiées de la souris, les effets de défauts au niveau moléculaire sur la structure et la fonction vasculaire pulmonaire peut être déterminée.

Protocole

Dans ce protocole, nous démontrons une isolés, aérés, la préparation perfusé des poumons de souris qui a déjà été utilisé pour quantifier l'impact de l'embolie pulmonaire et de l'hypoxie chronique sur pulsatile vasculaire pulmonaire pression-débit relations (Tuchscherer, Webster et Chesler, 2006; Tuchscherer et al ., 2007). En bref, les poumons de souris sont chirurgicalement isolés de tissus environnants, placé dans une chambre chauffée (IL-1; Harvard Apparatus, Holliston, MA) et ventilé (ventilatoire module de commande (VCM)-R avec minuterie contre Module (TCM); Harvard Appareil). La vascularisation du poumon est perfusée avec du milieu RPMI 1640 chauffée culture c....

Discussion

Les étapes critiques dans la chirurgie

Il est essentiel que l'on prend soin lors de la coupe de la cage thoracique loin dans les poumons. Les poumons doivent être complètement dégagées et sans entraves par les tissus environnants pendant l'inflation mais pas endommagés pendant le processus d'isolement. L'utilisation d'un objet plat comme la partie arrière de la pince peut être utilisée pour maintenir les poumons loin de la paroi thoracique afin qu'il y ait une voie clair.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringue de 1 ml	Fisher Scientific	14-829-10F
Seringue de 10 ml	Fisher Scientific	14-823-2A
Seringue de 60 ml	Fisher Scientific	13-689-8
RPMI avec GLN 6/PK	Fisher Scientific	MT10040CV
Filtres bouteille à embout vissable	Fisher Scientific	09-761-57
Ficoll PM 70	Sigma-Aldrich	F2878-100g
Héparine	Sigma-Aldrich
Y27632	Sigma-Aldrich	Y0503
Ciseaux à iris à boule angulés	Fine Science Tools	14109-09
Ciseaux ressort Vannas - lames de 4 mm	Fine Science Tools	15018-10
Ciseaux à iris fins - droits	Fine Science Tools	14106-09
Pinces Dumont n°5/45	Fine Science Tools	11251-35
Pinces médicales de biologie Dumont	Fine Science Tools	11254-20
Lauda E100 ECO-line 003	VWR international	Comparable à Lauda-Brinkmann E-103, 62400-922
Système pulmonaire isolé perfusé chez la souris IL-1	Harvard Apparatus	739904
Transducteur de pression sanguine P75 pour module PLUGSYS	Harvard Apparatus	730020
Modules de débit TS410	Transonic	TS410
Senseurs de débit en ligne haute précision ME 4 PXN	Transonic	ME 4 PXN
Pompes à plusieurs seringues Cole-Parmer	Cole-Parmer	EW-74900-20
Nembutal 50 mg/mL, flacon de 20 ml	Amatheon