Evaluation de développement des glandes mammaires et fonction dans des modèles murins

Résumé

Cette méthode décrit comment disséquer et d'évaluer le développement des glandes mammaires et de la fonction de souris. Excisées glandes mammaires sont évalués pour le degré de développement en utilisant mount ensemble, tandis que l'éjection du lait est évaluée en utilisant une ocytocine essai basé sur la contraction des cellules myoépithéliales.

Résumé

La glande mammaire humain est composé de lobes 15-20 que le lait sécrètent dans une ouverture du système conduit au branchement du mamelon. Ceux lobes sont eux-mêmes composés d'un nombre d'unités terminales lobulaire conduit en alvéoles sécrétoires et des conduits convergents ^1. Chez la souris, une architecture similaire est observée à la grossesse dans laquelle les conduits et les alvéoles sont entrecoupées dans le stroma de tissu conjonctif. L'épithélium glande mammaire de souris est un arbre comme système de conduits composé de deux couches de cellules, une couche de cellules luminales entouré par une couche externe de cellules myoépithéliales notée par les limites d'une membrane de ² sous-sol. À la naissance, seulement un arbre canalaire rudimentaire est présent, composé d'un conduit de branches primaires et 15-20. Direction l'élongation et de commencer d'amplification au début de la puberté, environ 4 semaines, sous l'influence des hormones ^3,4,5. A 10 semaines, la plupart du stroma est envahi par un système complexe de canaux qui seront soumis à des cycles de ramification et de régression dans chaque cycle œstral jusqu'à la grossesse ^2. Au début de la grossesse, une deuxième phase de développement commence, avec la prolifération et la différenciation de l'épithélium pour former des structures en forme de raisin sécrétion de lait appelés alvéoles ^6,7. Après l'accouchement et pendant l'allaitement, le lait est produit par les cellules sécrétrices luminale et stockée dans la lumière des alvéoles pulmonaires. L'ocytocine communiqué, stimulée par un réflexe neurale induite par l'allaitement des bébés, induit des contractions synchronisée des cellules myoépithéliales autour des alvéoles et le long des canaux, permettant de lait pour être transportés à travers les conduits vers le mamelon où il devient à la disposition des ^huit chiots. Développement de la glande mammaire, la différenciation et la fonction sont étroitement orchestré et exigent, non seulement les interactions entre le stroma et l'épithélium, mais également entre les cellules myoépithéliales et luminales dans l'épithélium ^9,10,11. Ainsi, des mutations dans plusieurs gènes impliqués dans ces interactions peuvent altérer soit un allongement canalaire durant la formation de la puberté ou alvéoles en début de grossesse, la différenciation en fin de grossesse et de l'activation sécrétoire conduisant à la lactation ^12,13. Dans cet article, nous décrivons comment disséquer glandes mammaires de souris et d'évaluer leur développement en utilisant monte entier. Nous démontrons également comment évaluer les contractions myoépithéliales et d'éjection du lait à l'aide d'un ex-vivo ocytocine basée sur l'analyse fonctionnelle. L'effet de la mutation d'un gène sur le développement des glandes mammaires et de la fonction peut donc être déterminée in situ par l'exécution de ces deux techniques chez les souris mutantes et de contrôle de type sauvage.

Protocole

1. Dissection des glandes mammaires

1. Euthanasier la souris en utilisant inhalation de CO _2. Évitez si possible dislocation cervicale car il peut endommager les vaisseaux sanguins principaux dans le cou et le résultat de l'accumulation de sang autour des glandes mammaires, ce qui rend la dissection plus difficile. Cependant, si d'autres critères doivent être évalués dans la même souris, tels que les niveaux sanguins de l'ocytocine, les méthodes alternatives d'euthanasie peut être nécessaire, même si cela doit être évalué par votre IACUC.
2. Sur une mousse de polystyrène enveloppé dans une feuille, placez la souris sur son dos et la propagat....

Discussion

Développement des glandes mammaires et la fonction sont étroitement orchestrée. Les souris mutantes pourraient abriter des mutations génétiques qui peuvent altérer le développement des glandes mammaires et de la fonction soulignant la nécessité d'évaluer l'architecture ^13,12 glande. De montage entières peuvent être réalisées comme décrit dans cet article à toutes les étapes du développement de la glande mammaire. Typiquement, le développement de l'épithélium est évalué au début de la puberté (~ 4 .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactifs	Société	Numéro de catalogue
Carmin	Sigma-Aldrich	C1022
Sulfate de potassium en aluminium	Sigma-Aldrich	A6435
Le thymol	Sigma-Aldrich	T0501
Salicylate de méthyle	Sigma-Aldrich	M6752
L'ocytocine	Sigma-Aldrich	O3251