Article de méthode

Caecale procédure Crevaison ligature

DOI :

10.3791/2860

7 mai 2011

Dans cet article

Résumé

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Le modèle murin de la ligature et ponction du caecum comme un outil précieux pour l'étude du sepsis humain.

Résumé

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Sepsis humain est caractérisé par un ensemble de réactions systémiques en réponse à l'infection intensive et massive qui a échoué à être contenues localement par l'hôte. Actuellement, les rangs septicémie parmi les dix premières causes de mortalité dans les unités de soins intensifs de l'USA 1. Au cours du sepsis, il ya deux phases établies hémodynamiques qui peuvent se chevaucher. La phase initiale (hyperdynamique) est défini comme une production massive de cytokines pro-inflammatoires et des espèces réactives de l'oxygène par les macrophages et les neutrophiles qui affecte la perméabilité vasculaire (conduisant à une hypotension), la fonction cardiaque et induit des changements métaboliques aboutissant à une nécrose des tissus et de défaillance d'un organe. En conséquence, la cause la plus fréquente de mortalité est lésions rénales aiguës. La deuxième phase (hypodynamique) est un processus anti-inflammatoire impliquant modifié la présentation des antigènes de monocytes, une diminution de la prolifération des lymphocytes et la fonction et l'apoptose accrue. Cet état connu comme une immunosuppression ou immunodépression augmente fortement le risque d'infections nosocomiales et, finalement, la mort. Les mécanismes de ces processus physiopathologiques ne sont pas bien caractérisés. Parce que les deux phases du sepsis peut causer des dommages irréversibles et irréparables, il est essentiel de déterminer le statut immunologique et physiologique du patient. C'est la principale raison pour laquelle de nombreux médicaments ont échoué. Le même médicament donné à différents stades du sepsis peut être thérapeutique ou autrement nuisibles ou n'ont pas d'effet 2,3. Pour comprendre la septicémie à différents niveaux, il est crucial d'avoir un modèle animal approprié et complet qui reproduit l'évolution clinique de la maladie. Il est important de caractériser les mécanismes physiopathologiques survenant au cours de la septicémie et contrôler les conditions de modèle pour tester des agents thérapeutiques potentiels.

Pour étudier l'étiologie de chercheurs sepsis humain ont développé différents modèles animaux. Le modèle le plus largement utilisé est la ligature du cæcum cliniques et la ponction (CLP). Le modèle CLP compose de la perforation du cæcum permettant la libération de matières fécales dans la cavité péritonéale pour générer une réponse immunitaire induite par exacerbé infection polymicrobienne. Ce modèle répond à la condition humaine qui est cliniquement pertinent. Comme chez les humains, les souris qui subissent CLP avec la réanimation liquidienne montrent les premiers (premières) phase hyperdynamique que le temps progresse à la deuxième (en retard) de phase hypodynamique. En outre, le profil des cytokines est similaire à celle observée dans le sepsis humain où il ya une augmentation apoptose des lymphocytes (examiné en 4,5). Grâce à des mécanismes multiples et se chevauchent impliqués dans le sepsis, les chercheurs ont besoin d'un modèle de septicémie convient de gravité contrôlé afin d'obtenir des résultats cohérents et reproductibles.

Protocole

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1. La ligature du cæcum et de la perforation comme un modèle de souris pour sepsis humain

Pour cette procédure de C57BL / 6 souris (7-9 semaines) sont utilisés.

  1. Anesthésier la souris par l'injection intrapéritonéale d'une solution de 01h01 kétamine (75mg/kg) et de xylazine (15mg/kg). Comme référence, injecter 30 ul de la solution de 01h01 dans une souris pesant 20 grammes. Alternativement, les souris peuvent être anesthésiés à l'isoflurane inhalées en utilisant un vaporisateur anesthésique.
  2. Rasage de l'abdomen de la souris et désinfecter région en solution de bétadine appliquant d'abord suivi en essuyant avec un alcoo....

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Discussion

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Ici, nous montrons en détail comment effectuer le modèle CLP chez la souris et de moduler le degré de gravité.

Comparé à d'autres modèles animaux de sepsis, CLP peut être effectuée dans n'importe quelle souche de souris d'âge et de sexe différents. C'est une procédure relativement simple et peu coûteux de chirurgie. Dans ce modèle, le grade de sévérité a un impact direct sur le pourcentage de survie. La longueur de la ligature, l'épaisseur de l'aiguille et le nombre d.......

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d'intérêt déclaré.
ont été effectuées en conformité avec l'Institut National de Guide de santé pour les soins et l'utilisation des animaux de laboratoire, et approuvé par le comité de soins des animaux et l'utilisation à l'Université Temple.

Remerciements

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Ce travail a été soutenu par une subvention de la Pennsylvania Department of Health.
Le Dr Miguel Garcia Toscano a été boursier postdoctoral à l'Université Temple, financé par la Fondation Alfonso Martin Escudero cours de cette étude.
Nous tenons à remercier Iliya Yordanov et Kotredes Kevin pour la réalisation de la vidéo.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Nom du réactif Société Numéro de catalogue Commentaires
La kétamine Ketaset 0856-2013-01
Xylazine AnaSed NADA # 139-236
29G seringue à insuline Exel 26028
Soie de suture, 6-0 PROLENE Ethicon 8680G
Aiguille 19G et 25G BD 305186
Rasoir Approvisionnement général Approvisionnement général
Lampe chauffante infrarouge Approvisionnement général Approvisionnement général
Michel plaies clips 7mm Roboz Surgical Instruments RS-9270
Oreille Boucle Masque Fisher Scientific 19-130-4181
Ciseaux de dissection Roboz Surgical Instruments RS-6702
Solution de Betadine VWR 63410-992
Pinces chirurgicales Roboz Surgical Instruments RS-5135
70% pad alcool isopropylique Fisher Scientific 22-031-350
La buprénorphine Labs Bedford 55390-100-10
Le tramadol Sigma-Aldrich 42965

Références

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  1. Angus, D. C. Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care. Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).
  2. Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. The enigma of sepsis. J Clin Invest. 112,....

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Mots-clés

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