$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Logement de base des souris
- Hébergez les souris dans des cages en plastique avec des fonds et des côtés solides, ainsi qu’une couche de litière molle et de matériaux de nidification tels que du déchiquetage de papier. Utilisez une litière composée d’épis de maïs râpés ou de copeaux de bois, et assurez-vous que la litière est changée régulièrement pour l’assainissement.
- Fournir un accès à la nourriture et à l’eau à volonté. Le haut de la cage en plastique abrite une trémie alimentaire. Distribuez des granulés de nourriture pour souris correctement formulés à partir de la trémie alimentaire et fournissez un distributeur d’eau. Assurez-vous que le dessus de la cage est équipé d’un filtre à air pour protéger les souris des contaminants extérieurs.
- Maintenez les rythmes circadiens naturels des souris en suivant un cycle lumière-obscurité de 12 heures dans le logement. Effectuez des tests comportementaux au même moment de la journée, idéalement pendant le cycle d'obscurité de l'animal, par exemple le soir.
note: Il faut prendre soin de distinguer les souris dans le logement. Diverses méthodes pour distinguer les souris sont disponibles, telles que les poinçons d’oreille, les étiquettes d’oreille et les marques de queue.
2. Test du labyrinthe de Barnes : Construction
- Obtenez une planche de bois circulaire de 120 cm de diamètre.
- Découper 20 trous circulaires (4,5 cm de diamètre) sur le pourtour du cercle. Positionnez chaque trou à 2,5 cm du bord du labyrinthe et à 13 cm des trous voisins.
- Lissez les surfaces et peignez-les en blanc brillant (une couleur vive est recommandée).
- Désignez un côté de la planche du labyrinthe pour l’insertion de petits crochets à environ 2 à 3 cm de chacun des 20 trous et placez deux crochets pour chaque trou (un de chaque côté de chaque trou).
- Utilisez des disques noirs (en plastique) peu profonds pour couvrir les trous sur le côté du labyrinthe avec des crochets. Utilisez des crochets pour fixer des élastiques épais afin de maintenir les disques au fond du labyrinthe.
- Montez solidement le labyrinthe Barnes à 120 cm au-dessus du sol et à l’écart d’autres objets de taille similaire comme des tables ou des chaises. Une boîte ou un tabouret peut être utilisé pour soutenir le milieu du labyrinthe.
- Placez de grandes affiches blanches avec une forme sur chaque mur (triangle, cercle et croix) comme repères supplémentaires du labyrinthe sur 3 côtés du labyrinthe. Conservez les affiches sur les murs autour du labyrinthe pour chaque épreuve.
- Du dernier côté du labyrinthe, installez un rideau noir solide pour cacher les observateurs afin que les données puissent être enregistrées avec précision sans que les chercheurs ne soient visibles pour les souris sur le labyrinthe.
- Suspendez une caméra vidéo au-dessus de l'arène avec une vue à vol d'oiseau de toute la surface du labyrinthe.
- Nettoyez chaque surface du labyrinthe (disques noirs et boîte cible inclus) avec de l’eau, puis une solution d’éthanol à 70 % avant et après chaque essai de souris.
- Placez une source lumineuse de 100 W à 25 cm au-dessus du centre du labyrinthe (allumez/éteignez au début/à la fin de l’essai) et assurez-vous d’avoir les disques et les crochets face au sol.
note: Toutes les autres plafonniers de la pièce doivent être éteints pendant les tests. L’ajout d’un générateur de bruit à ultrasons suspendu à côté d’une lumière de 100 W est recommandé. Allumez/désactivez-le au début/à la fin de chaque essai.
3. Test du labyrinthe de Barnes : procédure
REMARQUE : Assurez-vous que tous les composants du labyrinthe sont nettoyés avec de l’eau et une solution d’éthanol à 70 % avant et après chaque essai, en laissant le temps de sécher complètement avant la reprise des essais. Assurez-vous d’avoir des produits de nettoyage prêts ainsi que des minuteries pour les essais.
- Hébergez toutes les souris en groupes tout en utilisant une méthode d’identification fiable. Gardez les souris à l’extérieur de la salle de test lorsqu’elles ne courent pas activement dans le labyrinthe. Il s’agit de s’assurer qu’ils ne sont pas soumis prématurément au bruiteur ultrasonique.
- Manipulez les souris en les ramassant doucement et en les tenant par la base de la queue, avec les pattes gardées sur la main.
- Pour l’entraînement, faites courir les souris dans le labyrinthe quotidiennement une fois par jour pendant 7 jours consécutifs pour évaluer l’apprentissage/l’acquisition.
note: Un seul essai à long terme peut être effectué à une date ultérieure pour évaluer la mémoire et la rétention. Le protocole actuel a entraîné des souris adolescentes à partir du 32e jour postnatal et un essai à long terme a été réalisé chez des adultes à l’âge de 4 mois.
- Attribuez aléatoirement chaque souris à un trou cible à utiliser tout au long de la période de test. Les trous peuvent être étiquetés de 1 à 20 au fond du labyrinthe ou à l’extérieur du périmètre du labyrinthe, où ils ne sont pas visibles par la souris dans le labyrinthe.
- Remplacez le disque perforé attribué par une petite boîte noire (23 x 11 cm). Fixez-le fermement au labyrinthe de Barnes à l’aide d’élastiques reliés aux crochets les plus proches.
note: La boîte cible est suffisamment peu profonde pour que la souris puisse facilement y descendre ou contient un pas pour s’assurer que la souris n’a pas à y sauter.
- Placez la souris au centre du labyrinthe sous une tasse pour vous acclimater pendant 30 secondes jusqu’à ce que le test commence. Lancez l’enregistrement vidéo.
- Allumez la lumière et le bruiteur à ultrasons. Soulevez la tasse à l’aide d’un mécanisme de ficelle pour éviter de biaiser la tête initiale de l’animal. Démarrez une minuterie et asseyez-vous derrière le rideau pour observer.
- Une fois que la souris est entrée dans le trou cible, couvrez le trou avec la même coupelle opaque utilisée au début de l’essai ou un liant et éteignez le générateur de bruit à ultrasons. Si la souris n’est pas entrée dans la cible après 5 minutes, encerclez-la dans le trou de la cible.
- Assurez-vous que la souris entre dans le trou. Lorsque la souris se trouve à l’intérieur de la boîte cible, couvrez le trou et éteignez le bruiteur. Laissez la souris rester dans la boîte cible pendant 1 minute sans être dérangée.
- Bien que le trou cible reste constant pour chaque souris tout au long de la période d’entraînement, faites passer les souris dans un ordre aléatoire chaque jour pour vous assurer qu’elles ne suivent pas les indices/odeurs laissés par la souris précédente.