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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Analyse de l’empreinte
- Configurer la piste (Figure 1A)
- Coupez une feuille de papier blanc (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm) longitudinalement en trois longueurs de largeur égale. Posez une feuille de papier blanc (9,9 cm x 42 cm) sur la table.
- Placez la boîte de but sombre à l’extrémité distale du papier. Mettez d’autres boîtes (à peu près de la même longueur que celle du papier) avec les parois des deux côtés de la piste, empêchant ainsi les souris de s’échapper.
- Mettez de l’encre noire et de l’encre rouge dans des boîtes de Pétri séparées (35 mm de diamètre).
2. Séance d’entraînement
REMARQUE : N’effectuez la séance d’entraînement qu’à l’âge de 4 semaines.
- Placez une souris sur l’extrémité proximale du papier (face à la tête vers la boîte de but). Laissez la souris marcher de l’extrémité proximale à la boîte de but. Retirez la souris de la zone d’objectif. Si la souris s’arrête sur le papier, poussez doucement la souris vers la boîte de but avec le doigt.
- Tenez la souris en saisissant la peau entre le pouce et l’index pour limiter le mouvement des membres antérieurs. Ensuite, saisissez le dos et la queue entre la plante du pouce et les autres doigts pour limiter le mouvement des postérieurs.
note: Une tenue insuffisante de la souris entraîne des taches d’encre sur les vêtements.
- Plongez le bas des membres antérieurs dans de l’encre rouge et le bas des membres postérieurs dans de l’encre noire. Placez immédiatement la souris sur l’extrémité proximale du papier (face à la tête vers la boîte de but). Laissez la souris marcher de l’extrémité proximale à la boîte de but. Si la souris s’arrête sur le papier, poussez doucement la souris vers la boîte de but avec le doigt.
- Retirez la souris de la zone d’objectif. Allez à la session de test.
3. Séance de test
- Après la séance de formation, installez la piste pour les empreintes de pas à l’aide d’une nouvelle feuille de papier blanc découpée.
- Tenez la souris en saisissant la peau entre le pouce et l’index pour limiter le mouvement des membres antérieurs. Ensuite, saisissez le dos et la queue entre la plante du pouce et les autres doigts pour limiter le mouvement des postérieurs.
- Plongez le bas des membres antérieurs dans de l’encre rouge et le bas des membres postérieurs dans de l’encre noire. Placez immédiatement la souris sur l’extrémité proximale du papier. Laissez la souris marcher de l’extrémité proximale à la boîte de but.
REMARQUE : Parce que les souris préfèrent l’obscurité, la marche devient plus stable à mesure que la souris s’approche de la boîte de but sombre. Si la souris s’arrête sur le papier, poussez doucement la souris vers la boîte de but avec le doigt. Ensuite, si des empreintes fiables ne sont pas obtenues pour l’analyse parce que la souris s’est arrêtée, réessayez la session de test.
- Renvoyez la souris dans la cage d’accueil depuis la boîte de but. Nettoyez la boîte de but avec de l’éthanol à 70 % après chaque séance de test. Faites sécher à l’air libre le papier imprimé au pied.
4. Analyse des empreintes
- Obtenez trois mesures de chaque paramètre (longueurs de foulée des membres antérieurs et postérieurs, largeurs de la base avant et arrière, chevauchement entre les membres antérieurs et postérieurs, figure 1B) à l’aide d’une règle à partir de papier imprimé au pied.
note: Étant donné que les empreintes de pas des extrémités proximales et distales présentent souvent de grandes variations en raison de l’arrêt ou de la course, choisissez la partie avec un modèle de marche régulier d’empreintes de pas. La partie centrale du papier imprimé au pied conviendra généralement à l’analyse.
- Pour la longueur de la foulée, mesurez les distances entre les mêmes parties de la patte (par exemple, le coussinet de la patte ou l’orteil).
- Pour la largeur de la base avant, tracez une ligne entre les empreintes avant droites (ou gauches) consécutives. Ensuite, mesurez la longueur de la ligne verticale entre le tampon de l’empreinte avant gauche (ou droite) et la ligne tracée entre les empreintes droite (ou gauche).
- Pour la largeur de la base postérieure, tracez une ligne entre les empreintes postérieures droites (ou gauches) consécutives. Ensuite, mesurez la longueur de la ligne verticale à partir du coussinet de l’empreinte postérieure gauche (ou droite) jusqu’à la ligne tracée entre les empreintes droite (ou gauche).
- Pour le chevauchement, mesurez la distance entre les coussinets des empreintes avant et arrière gauche (ou droite).
- Faites la moyenne des trois mesures pour chaque individu. Utilisez la moyenne individuelle de chaque paramètre pour l’analyse statistique.
- Pour l’amplitude de foulée, utilisez la moyenne des moyennes individuelles des foulées gauche et droite.
- Pour l’asymétrie de l’amplitude de foulée, utilisez la valeur absolue de la différence entre les moyennes individuelles de l’amplitude de foulée du membre gauche et de la longueur de foulée du membre droit.
- Pour l’analyse statistique des autres paramètres (largeur de la base avant, largeur de la base arrière et chevauchement), utilisez directement la moyenne individuelle.