Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Induction SE
- Achetez des souris C57BL/6NHsd mâles de 8 semaines et pesez chaque souris. Ensuite, utilisez un marqueur pour marquer la queue de toutes les souris afin de les identifier facilement lors de l’induction de l’ES.
- Calculez la quantité de bromure de méthyle de scopolamine (scopolamine ; 2 mg/kg), d’hémisulfate de terbutaline (terbutaline ; 2 mg/kg) et de chlorhydrate de pilocarpine (pilocarpine ; 280 mg/kg) en fonction du poids de la souris et ajoutez une solution saline (0,9 % de NaCl, 10 mL/kg) pour obtenir des solutions.
REMARQUE : Par exemple, si le poids de la souris est de 25 g, les quantités suivantes sont appliquées : Scopolamine et terbutaline : 2 mg/kg * (25 g/1 000 g) = 0,05 mg, Solution saline : 10 mL/kg * (25 g/1 000 g) = 0,25 mL, Pilocarpine : 280 mg/kg * (25 g/1 000 g) = 7 mg, Solution saline : 10 mL/kg * (25 g/1 000 g) = 0,25 mL.
- Chargez le mélange de scopolamine et de terbutaline dans une seringue de 1 mL avec une aiguille de 30 G. Injectez la solution par voie intrapéritonéale dans chaque souris, puis renvoyez les souris dans leurs cages. 30 minutes après l’administration de scopolamine et de terbutaline, injecter une solution de pilocarpine dans chaque souris (i.p. ; seringue de 1 ml ; aiguille de 30 g). Immédiatement après l’injection de pilocarpine, placez les souris dans un incubateur (28-30°C) pour observation.
- Surveillez attentivement le comportement des souris jusqu’à ce que le SE soit induit. Si des crises motrices limbiques correspondant au stade 3 ou plus selon l'échelle de Racine sont détectées, notez le temps et surveillez les souris pour déterminer si les crises se produisent plus fréquemment. Une fois que les crises motrices continues durent plus de 2 minutes, placez la souris dans une nouvelle cage à température ambiante et surveillez pendant 3 heures pour déterminer si ses crises convulsives se poursuivent et si le SE est induit. Euthanasier les souris qui n’ont pas réussi à pénétrer dans l’ES environ 2 h après l’injection de pilocarpine.
REMARQUE : Échelle de Racine ; stade 1, mouvement de la bouche et du visage ; étape 2, tête hochant la tête ; stade 3, clonus des membres antérieurs ; stade 4, élevage avec clonus des membres antérieurs ; stade 5, cabrage et chute avec clonus des membres antérieurs. Si la souris n’est pas transférée dans la cage à température ambiante immédiatement après l’induction de l’ES, la souris peut mourir en raison de l’hyperthermie.
- Mettre fin aux crises aiguës comportementales 3 h après l’apparition de l’ES en injectant une solution de diazépam (i.p. ; 10 mg/kg ; seringue de 1 ml ; aiguille de 30 g). Préparez la solution de diazépam en diluant 5 mg/mL de diazépam dans de l’huile de ricin hydrogénée à 10 % de polyoxyle 35 en ajoutant une solution saline (i.p. ; 10 mL/kg ; seringue de 1 mL ; aiguille de 30 g).
REMARQUE : Solution d’huile de ricin hydrogénée polyoxyle 35 à 10 %: 1 mL de solution d’huile de ricin hydrogénée polyoxyl 35 + 9 mL de solution saline. Conservez la solution à température ambiante. Par exemple, si le poids du corps de la souris est de 25 g, injectez 250 μL de solution de diazépam : 50 μL 5 mg/mL de diazépam + 200 μL de solution d’huile de ricin hydrogénée à 10 % de polyoxyl 35 = 250 μL de diazépam à 1 mg/mL.
- Pour les souris fictives, effectuer une injection intra-performative du bromure de méthyle scopolamine et de l’hémisulfate de terbutaline (i.p. ; 2 mg/kg, 10 mL/kg ; seringue de 1 mL ; aiguille de 30 g). 30 min plus tard, injecter la solution saline par voie intrapéritonéale (i.p. ; 10 mL/kg ; seringue de 1 mL ; aiguille de 30 g).
REMARQUE : Si le poids du corps de la souris est de 25 g, injectez 250 μL de solution saline au lieu de pilocarpine.
- Après l’injection de diazépam (i.p. ; seringue de 1 mL ; aiguille de 30 g), administrer 1 mL de dextrose à 5 % par souris (i.p. ; seringue de 1 mL ; aiguille de 26 g).
REMARQUE : 1 mL d’injection de dextrose à 5 % fournit une source d’énergie et d’hydratation qui peuvent augmenter le taux de survie.
- Pendant les soins post-opératoires dans l’incubateur (28 à 30 °C), essuyez les sécrétions excessives telles que la salive, les larmes et les matières fécales.
- Au jour 1 après l’induction de l’ÉS, pesez les souris et conservez-les dans l’incubateur (28-30 °C) pendant une journée supplémentaire. Au jour 2, après l’induction de l’ÉS, pesez les souris et retournez-les dans leur cage d’origine. Fournir une nourriture humide pour faciliter leur récupération.
REMARQUE : Dans cette expérience, le taux de mortalité pour C57BL/6NHsd après l’arrêt de l’ES était de 8,57 % en moyenne (3 souris sur 35 testées).
- Mesurer le poids corporel quotidien des animaux jusqu’à 7 jours après l’administration de la pilocarpine et injecter aux souris du dextrose à 5 % (i.p. ; seringue de 1 ml ; aiguille de 26 g) lorsque le poids corporel n’a pas augmenté. Arrêtez la surveillance du poids corporel lorsque les souris commencent à reprendre du poids corporel et consommez de la nourriture humide sans difficulté 2 jours après l’injection de pilocarpine.
REMARQUE : Si le poids corporel d’une souris n’a pas augmenté avant 7 jours après l’ES, excluez la souris de l’expérience et euthanasiez-la au dioxyde de carbone. Selon l’arrière-plan de la souris, la mort peut parfois survenir ; cependant, dans le cas de C57BL/6NHsd, moins de 1 % des souris sont mortes dans ces expériences. Avec une survie de plus de 7 jours après l’induction de l’ES, les souris meurent rarement pendant la période de latence.
