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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Labyrinthe d’eau à mémoire de travail
- équipement
- Utilisez un réservoir rempli d’eau à une hauteur de 28 cm et maintenu à 26 ± 1 °C.
- Utilisez une plate-forme en verre acrylique transparent de 10 cm de diamètre sur un support de 26 cm de hauteur.
note: La surface supérieure de la plate-forme doit être recouverte de silicone en forme de cercle traversé d’un X. Cela permet aux rats de grimper sur la plate-forme et leur donne de la traction pour qu’ils ne glissent pas.
- Rassemblez un chronomètre, une lampe chauffante, des serviettes jetables, des tampons absorbants, des cages supplémentaires et un petit filet d’aquarium à long manche. Utilisez un système de suivi vidéo informatisé connecté à une caméra vidéo pour enregistrer le rat nager et envoyer les données à l’ordinateur. Enregistrez la vidéo et les données sur l’ordinateur pour une analyse ultérieure.
- Test du labyrinthe aquatique de la mémoire de travail
- Donnez aux rats quatre paires d’essais chaque jour pendant cinq jours consécutifs, placez la plate-forme dans chacun des quatre quadrants et démarrez les rats à partir de chacun des quatre points de départ (N, S, E, W) comme décrit ci-dessous.
- Tout d’abord, définissez les paires emplacement-plateforme de départ à utiliser tout au long de l’expérience.
REMARQUE : L’ordre des quadrants où se trouve la plate-forme et le point de départ utilisé doit être dans un ordre différent pour chacun des cinq jours de natation, mais le même pour chaque rat.
- Utilisez quatre points de départ (N, S, E ou W) et quatre emplacements de plate-forme (quadrants 1, 2, 3 ou 4 ; Figure 1). Par exemple, (N, 2 ; E, 4 ; S, 1 ; W, 3 ; voir Figure 1). Prévoyez un ordre équilibré (pas aléatoire) pour éviter que les points de départ ne soient trop proches des quais (aucun point de départ n’est le même quadrant que l’emplacement des quais). Établissez une fiche technique à l’aide des quadrants de la plateforme et des quatre points de départ.
- Rédiger un protocole que le logiciel de suivi vidéo utilisera pour filmer les rats en train de nager et pour collecter des données spécifiques (par exemple, la durée de la nage, la vitesse, la distance parcourue avant de trouver la plateforme).
note: Le logiciel de suivi arrêtera automatiquement l’enregistrement après la durée spécifiée. Le protocole devrait permettre de préciser l’emplacement de la plateforme, le nombre d’essais à effectuer par animal et le nombre d’animaux qui seront testés par séance, ainsi que la durée maximale permise (p. ex., 120 s).
- Testez 4 à 6 rats par session.
note: Plus de 6 rats créent un problème dans le timing entre les rats et peuvent entraîner une erreur de la part du maître. Les boîtes chauffantes sont également bondées.
- Essai 1
- Ouvrez le logiciel de suivi vidéo et chargez le protocole correct, y compris la carte du labyrinthe d’eau.
- Placez la plate-forme à l’endroit désigné (p. ex., 2 ; Figure 1) et vérifiez qu’il correspond à la carte dans le logiciel. Préparez le logiciel de suivi pour qu’il démarre lorsque le rat entre dans le champ de vision de la caméra vidéo.
- Placez le rat dans le réservoir face au mur à l’endroit désigné (p. ex., N ; Figure 1) et démarrez immédiatement la minuterie.
- Laissez le rat 120 s trouver la plate-forme. Lorsque le rat trouve la plate-forme, arrêtez le chronomètre et notez le temps sur la feuille de travail. Si le rat ne trouve pas la plate-forme, conduisez-le à la main jusqu’à la plate-forme et enregistrez 120 s. Laissez le rat 15 s rester sur la plate-forme.
- Essai 2
- Vérifiez que le logiciel est prêt pour la version d’essai 2. Remettez le rat dans le réservoir à la même position de départ (N). Répétez l’étape 1.2.3.4.
- Après l’épreuve 2, placez le rat dans l’enclos chauffé pendant 4 min. Déplacez la plate-forme vers le deuxième emplacement (4 ; Figure 1), et vérifiez qu’il correspond à la carte dans le logiciel.
- Répétez les procédures des essais 1 et 2 (étapes 1.2.3 à 1.2.4) jusqu’à ce que les quatre appariements emplacement/plate-forme de départ soient terminés.