Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Chirurgie d’implantation de poteau de tête
REMARQUE : Assurer l’utilisation d’instruments stériles et organiser la chirurgie et la récupération dans différentes zones. Une fois maîtrisée, la procédure d’implantation dure environ 30 min.
- Pour l’analgésie, 30 min avant le début de l’intervention, injecter par voie sous-cutanée de la buprénorphine (0,05 mg/kg) et remettre l’animal dans sa cage d’origine.
note: Les effets analgésiques de la buprénorphine durent environ 12 h, bien après la fin de la procédure. D’après notre expérience, les souris ne montrent aucun signe de détresse lié à cette intervention, mais une dose ultérieure de 0,05 mg / kg de buprénorphine est recommandée 24h après la chirurgie.
- Anesthésier l’animal dans une chambre contenant de l’isoflurane gazeux à 2,5 % à 3 %. Attendez 3 min et vérifiez si la souris est correctement anesthésiée en observant la respiration et l’absence de mouvement à l’intérieur de la chambre. Passez la souris dans un cône nasal sur une table d’opération avec un coussin chauffant et, par pincement interdigital, vérifiez qu’il n’y a pas de réflexe de retrait et abaissez l’isoflurane à 1,5
%.
- Rasez la tête de la souris à l’aide d’un rasoir électrique. Pour obtenir un environnement stérile, frottez la zone rasée avec une solution iodée et ensuite avec de l’alcool à 70 %. Répétez cette procédure deux fois de plus.
- Injectez du chlorhydrate de lidocaïne (2 %, 2 mg/kg) sous la peau de la tête pour une anesthésie locale et attendez 5 min pour que les effets commencent. Pour éviter les lésions oculaires dues à la sécheresse, couvrez les yeux de la souris avec une pommade vétérinaire ophtalmique topique.
- À l’aide d’une paire de pinces émoussées, saisissez la peau à l’arrière de la tête et, à l’aide d’une paire de ciseaux émoussés (ou d’un scalpel), faites une incision longitudinale d’environ 1,5 cm pour exposer le crâne.
- À l’aide d’un scalpel, grattez le périoste. Attention à ne pas trop gratter, car la fixation de l’écrêton peut être compromise si le crâne commence à saigner légèrement.
- Appliquez une goutte de l’activateur vert (voir Tableau des matériaux) au milieu du crâne. Cela améliorera la fixation du ciment en augmentant la perméabilité osseuse.
- Préparez le ciment : mélangez une cuillère (voir tableau des matériaux) de polymère avec cinq gouttes de monomère et une goutte de catalyseur. À l’aide d’un pinceau, appliquez une quantité généreuse du mélange de ciment entre les repères du crâne lambda et bregma.
- Placez rapidement le poteau de tête sur le ciment avec un mouvement de balayage allant de lambda à bregma. Une fois que le poteau de tête a été placé, réappliquez plus de ciment autour de la partie inférieure pour vous assurer que le poteau de tête adhère correctement au crâne. Pour garantir une bonne fixation, assurez-vous que le ciment est appliqué abondamment et qu’il sèche avant de passer à l’étape suivante.
note: Avec cette procédure de fixation, le poteau de tête ne se détachera pas et permettra des tests répétés à long terme ; Entre nos mains, l’élimination des poteaux de tête est de <10 %.
- Préparez le mélange de résine en appliquant un rapport poudre/liquide qui permet une consistance lisse du mélange. Appliquez la résine à l’endroit où le ciment a été appliqué ainsi qu’autour du poteau de tête afin de protéger sa surface.
- Attendez 3 min que la résine sèche et fermez la peau à l’arrière des oreilles avec une suture monofilament. À l’aide d’un coton-tige, appliquez une solution d’iode diluée (10 à 20 %) sur la zone opérée.
note: Assurez-vous que la peau ne colle pas à la résine.
- Éteignez l’anesthésie et placez l’animal sous une lumière rouge chaude pour éviter l’hypothermie. Placez de la nourriture humidifiée et de l'hydrogel ou une autre source d'eau à base de gel dans le sol de la cage. Ne laissez pas la souris sans surveillance jusqu’à ce qu’elle reprenne conscience. Dès que l’animal se remet complètement de la procédure (généralement, 30 min à 1 h après), placez-le dans une cage avec des groupes de trois ou quatre pour stimuler les interactions sociales.