L’échocardiographie chez la souris : une technique non invasive pour évaluer la morphologie cardiaque

Résumé

Source : Baudouy, D., et al. Examen échocardiographique et histologique de la morphologie cardiaque chez la souris. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo décrit un protocole permettant d’effectuer une échocardiographie sur une souris de laboratoire.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Échocardiographie

1. Déterminez le poids corporel de la souris à l’aide d’une balance de laboratoire standard tout en la tenant légèrement par la queue pour assurer un bon positionnement.
2. Anesthésier l’animal par l’injection intrapéritonéale (i.p.) de 50 mg/kg de pentobarbital.
   note: Tout autre type d’anesthésie peut être utilisé si le même protocole est utilisé tout au long de l’étude. Les avantages et les inconvénients seront discutés ci-dessous.
3. Remettez la souris dans sa propre cage et attendez qu’elle ne réponde plus, qu’elle montre une respiration régulière et que les réflexes du pied arrière soient absents. Pour tester cela, serrez légèrement un pied et observez si la jambe se rétracte toujours.
4. Rasez le côté gauche du thorax et l’aisselle gauche à l’aide d’un rasoir à rongeurs du commerce.
   note: L’utilisation d’un rasoir dédié aux rongeurs permet l’élimination complète des poils fins de souris afin d’éviter les interférences dans la mesure échocardiographique. Les crèmes ou solutions dépilatoires commerciales sont à éviter, car elles sont généralement parfumées, ce qui dérangera l’animal après son réveil. Évitez le rasage excessif, car il augmente les pertes de chaleur.
5. Placez l'animal endormi sur un coussin chaud réglé à 40-42 °C dans une position peu profonde du côté gauche, avec la tête à 12 heures et la queue à 6 heures. Fixez le bras gauche, la jambe gauche et la queue avec du ruban adhésif.
6. Appliquez du gel d’échocardiographie préchauffé sur la poitrine rasée et la tête du transducteur.
7. Placez le transducteur parasternal gauche, en le dirigeant vers le côté droit du cou pour obtenir une vue parasternale bidimensionnelle (2D) à grand axe au niveau du muscle papillaire. Tournez le transducteur de 90° dans le sens des aiguilles d’une montre pour obtenir une vue à court axe au niveau des muscles papillaires. Utilisez un réglage de profondeur minimal et un zoom pour maximiser la qualité de l’image et la fréquence d’images. Réglez la vitesse de balayage au maximum.
   1. Pour obtenir ces paramètres, différentes options de réglage du zoom et de la profondeur peuvent être utilisées, en fonction de la machine et du logiciel. Enregistrez des images guidées en mode M en 2D dans une vue sur un axe court. Reportez-vous à la Figure 1A et à B.
      note: Veillez à ne pas appliquer une pression excessive sur la poitrine, car cela pourrait provoquer une bradycardie.
8. Enregistrez au moins 3 séries de 3 boucles de cinéma de pulsation pour chaque animal.
   note: Pour le logiciel d’échocardiographe utilisé dans cette étude, appuyez une seule fois sur le bouton « Acquérir/Enregistrer ». Cette méthodologie est spécifique à l’échocardiographe avec ce logiciel particulier. D’autres progiciels peuvent être utilisés avec différentes machines.
9. Après des enregistrements réussis, essuyez le gel d’échocardiographie du thorax de la souris, du coussin chauffant et du transducteur. Retirez le ruban adhésif des membres et de la queue.
10. Laissez la souris en observation sur le coussin chauffant, recouverte d’un mouchoir en papier pour éviter une exposition inutile à la lumière et une perte de chaleur, jusqu’à ce qu’elle se réveille.
11. Remettez l’animal dans sa cage.
12. Analysez les images enregistrées en mode M à partir d’une vue parasternale à court axe pour déterminer les dimensions et la fonction du ventricule gauche (VG). Mesurez l’épaisseur de la paroi antérieure du VG dans la systole et la diastole (LVAWs et LVAWd), les diamètres internes end-systolique et end-diastolique du VG (LVIDs et LVIDd), et l’épaisseur de la paroi postérieure du VG (LVPW) dans la systole et la diastole (LVPW et LVPWd) en utilisant l’identification de l’interface tissu-sang sur les images stockées.
13. Mesurez les dimensions diastoliques au moment des dimensions diastoliques maximales apparentes du VG et les dimensions end-systoliques du VG au moment de l’excursion systolique la plus antérieure de la paroi postérieure du VG. Appuyez sur l’écran tactile sur l’icône « Analyser », puis sur l’icône « LVAWd ». Positionnez le pied à coulisse électronique à l’interface entre la cavité ventriculaire droite et la paroi antérieure du VG en diastole.
14. Positionnez le pied à coulisse électronique sur l’interface entre la paroi antérieure du VG et la cavité VG pour obtenir l’épaisseur de la paroi antérieure diastolique du VG ; le logiciel basculera directement sur la mesure interne de la fin de la diastolique VG.
15. Positionnez le pied à coulisse à l’interface entre la cavité BT et la paroi postérieure BT pour obtenir le diamètre interne fin diastolique BT ; le logiciel basculera sur la mesure de l’épaisseur de la paroi postérieure VG.
16. Positionnez l’étrier à l’interface entre la paroi postérieure du VG et le péricarde pour obtenir l’épaisseur de la paroi postérieure diastolique du VG. Pour les dimensions systoliques du VG, appuyez sur l’écran tactile de l’icône « LVAWs » et positionnez le pied à coulisse électronique sur l’interface entre la cavité ventriculaire droite et la paroi antérieure du VG en systole.
17. Positionnez le pied à coulisse électronique sur l’interface entre la paroi antérieure BT et la cavité VG pour obtenir l’épaisseur de paroi antérieure systolique BT. Répétez le processus comme décrit ci-dessus pour le diamètre interne de l’extrémité systolique VG et l’épaisseur de la paroi postérieure systolique VG. Utilisez la convention de pointe adoptée par l’American Society of Echocardiography pour tracer les frontières endocardiques et épicardiques.
    note: Les paramètres de fonction contractile LV seront calculés automatiquement à l’aide des mesures précédentes. Le raccourcissement fractionnel LV (FS) est défini comme FS ( %) = [(LVIDd - LVIDs)/LVIDd] x 100. La fraction d’éjection VG (FE) est calculée à l’aide de la formule de Teicholz modifiée, où FE ( %) = [(LVIDd³ - LVIDs³)/LVIDd³] x 100¹². Reportez-vous à la Figure 1A, B.
18. Stockez les données sur des disques compacts ou des clés USB et faites-en des copies de sauvegarde.
19. Importez, analysez et exportez les données à l’aide du logiciel approprié.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Gel de transmission par ultrasons ; Gel Aquasonic 100	Parker
Sonde à ultrasons linéaire ; L15-7io	Philips Healthcare
Échocardiographe ; IE33 xMATRIX	Philips Healthcare
Rasoir pour rongeurs	Appareil de Harvard	Référence 34-0243