Prélèvement de dépôts de graisse péritonéale : une technique pour étudier la colonisation des tissus adipeux péritonéaux par le cancer de l’ovaire dans des modèles murins

Résumé

Source : Krishnan, V. et al. In Vivo et Ex Vivo Approches pour étudier la colonisation métastatique du cancer de l’ovaire des structures de taches laiteuses dans le tissu adipeux péritonéal. J. Vis. Exp. (2015)

Dans cette vidéo, nous utilisons un modèle de souris femelle euthanasiée porteuse d’un cancer de l’ovaire. Nous décrivons ensuite un protocole permettant d’identifier et d’extraire les dépôts graisseux ou les tissus adipeux associés aux cinq organes péritonéaux primaires afin d’étudier la colonisation des cellules cancéreuses métastatiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation des animaux pour les études expérimentales

1. Permettre aux animaux de s’acclimater à un nouveau logement et à un nouvel environnement, de se remettre des effets physiologiques potentiels du transport et de la manipulation.
   note: La technique suivante est applicable à toutes les souches de souris disponibles dans le commerce. Le nombre d’animaux à utiliser pour une expérience dépend de la conception de l’étude et doit être fait en consultation avec un statisticien.

2. Identification et isolement des dépôts de graisse péritonéale

1. Euthanasier les animaux par surdose de CO₂ et une méthode physique secondaire pour confirmer la mort.
2. Comme le prélèvement des dépôts de graisse péritonéale constitue l’ablation d’organes internes (méthode secondaire), faites une incision médiane près des papilles inguinales à travers la paroi péritonéale pour exposer les organes internes (Figure 1A).
3. Pour la graisse omentale (MO), exposez le complexe omental/pancréatique en étendant la rate de la cavité péritonéale à l’aide d’une pince (Figure 1C). Libérez l’épiploon du pancréas et de la rate en coupant étroitement toutes les connexions tissulaires. Assurez-vous que tout tissu pancréatique restant est excisé.
4. Pour la graisse gonadique (GF), utilisez des pinces pour soulever la graisse gonadique entourant les ovaires et exciser en coupant les connexions tissulaires (Figure 1A en haut à droite).
5. Pour la graisse utérine (FI), utilisez des pinces pour soulever la graisse utérine entourant les cornes utérines et excisez en coupant les connexions tissulaires (Figure 1A en bas à droite).
6. Pour la graisse mésentérique (MF), coupez la jonction entre l’intestin grêle et le pylore. À l’aide d’une pince, saisissez fermement l’extrémité libre de l’intestin grêle et retirez-la lentement de la graisse mésentérique. Libérez la graisse mésentérique de la racine mésentérique à l’aide de ciseaux de dissection (Figure 1A en bas à gauche).
7. Pour la graisse splénoportale (SF), soulevez l’extrémité distale de la rate à l’aide d’une pince pour exposer la fine bande graisseuse de tissu reliant le hile de la rate au pancréas. Excisez la graisse splénoportale en la libérant d’abord du pancréas, puis en la disséquant soigneusement de la rate (Figure 1B).

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Outils de dissection	Outils scientifiques fins	Na
Pbs	Corning	Référence 21-040-CV	Sans calcium ni magnésium