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Article de méthode

Échantillonnage de tissus cancéreux de la prostate pour la mise en banque de biobanques : une technique ciblée guidée par IRM pour éliminer les poinçons de biopsie de tissus tumoraux frais

3.2K vues

30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

Source : Heavey, S. et al. Utilisation des données d’imagerie par résonance magnétique et de biopsie pour guider les procédures d’échantillonnage pour les biobanques du cancer de la prostate. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo présente une technique basée sur des données IRM pour cibler des régions spécifiques contenant des tumeurs dans le tissu prostatique pour l’échantillonnage. Les échantillons de biopsie collectés peuvent être soit stockés à des fins de biobanque, soit utilisés pour une analyse ultérieure en aval.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.

1. Appareil de tranchage de la prostate

  1. Achetez l’appareil de tranchage de la prostate (table des matériaux). Vous pouvez également imprimer un manche de lame à l’aide d’une imprimante 3D.

2. Ciblage tumoral

  1. Examiner les notes cliniques pour identifier la lésion index telle qu’indiquée par la biopsie diagnostique, par exemple, postérieure gauche.
  2. Examinez les images IRM pour mesurer l’emplacement de la tumeur ci-dessus.
    1. Trouvez la séquence où la tumeur est la plus visible dans le plan axial, par exemple, pondérée T2.
    2. Faites défiler les images axiales pour trouver l’image où la tumeur est la plus grande et imprimez l’image pour référence.
    3. Dans l’image coronale correspondante, mesurez la distance entre la base de la prostate et la position axiale sélectionnée, et la longueur totale de la prostate de l’apex à la base (mm), et imprimez-la pour référence.

3. Collecte de la prostate

  1. Vérifiez les notes du patient pour vous assurer qu’un consentement éclairé approprié a été obtenu pour cette procédure et toute application de recherche en aval.
  2. Après une prostatectomie radicale, prélever la prostate dans un pot sec. Assurez-vous qu’aucun formol ou autre fixateur n’a été ajouté à la prostate.
  3. Transfert vers un endroit stérile approprié pour l’échantillonnage, par exemple une hotte à flux laminaire dans un laboratoire de pathologie.
  4. Procéder à l’échantillonnage dès que possible si des tissus frais sont nécessaires.
    REMARQUE : Pour certaines applications (p. ex., l’évaluation de l’ADN, qui ne doit pas se dégrader aussi rapidement que l’ARN), il peut être approprié de réfrigérer l’échantillon et de prélever des échantillons le lendemain.

4. Préparation de l’échantillon

  1. Préparer la hotte à flux laminaire et l’appareil de tranchage de la prostate selon les procédures de décontamination locales, en utilisant des techniques stériles. Ici, vaporisez de l’éthanol à 70 % et essuyez sur toutes les surfaces. Utilisez des aiguilles stériles à usage unique et des scalpels. Utilisez les lames de la trancheuse jusqu’à trois fois ; Lavez après chaque utilisation à l’eau chaude savonneuse, puis vaporisez et essuyez avec de l’éthanol à 70 %.
  2. Pesez la prostate (g) à l’aide d’une balance standard.
  3. Encré la prostate. Peignez le côté gauche avec de l’encre bleue et le côté droit avec de l’encre noire. Recouvrez la capsule complète et les vésicules séminales avec de l’encre pour indiquer plus tard les marges chirurgicales.
    REMARQUE : Les procédures d’encrage peuvent varier localement et peuvent être modifiées en conséquence.

5. Tranchage de la prostate

  1. Assemblez l’appareil de tranchage en insérant les parois perpendiculairement à la base du support (Figure 1A).
  2. Placez la prostate de manière à ce que la base et l’apex soient face aux parois opposées, avec le côté postérieur vers le bas et le côté antérieur vers le haut. Placez des épingles dorées autour de la prostate. Poussez légèrement la prostate vers l’intérieur si nécessaire pour obtenir un ajustement parfait, ce qui soutiendra la prostate pendant le tranchage.
  3. Mesurez la longueur de la prostate de la base à l’apex à l’aide d’une règle et comparez-la à la longueur de la prostate mesurée par IRM. Si la prostate a rétréci, appliquez une correction ad hoc à la distance prévue entre la base et la tranche transversale cible. Par exemple, si la longueur totale de la prostate sur l’image IRM est de 50 mm, mais qu’elle est mesurée à l’aide d’une règle à ce stade, elle montre qu’elle a rétréci à 45 mm, puis réduit la position de tranchage prévue de 10 %.
  4. Mesurez de la base à la tranche transversale souhaitée. Choisissez la goupille qui se trouve le plus près de cette mesure à découper.
  5. Munissez-vous de gants en cotte de mailles pour éviter les blessures, tenez le dispositif de tranchage (Figure 1B), placez les lames de chaque côté de la goupille identifiée et utilisez l’entretoise pour maintenir les lames à une distance de 5 mm. Prenez une tranche en déplaçant lentement et fermement les lames vers le bas, vers l’avant et vers l’arrière à l’aide de longs mouvements (Figure 1C). Assurez-vous qu’une tranche entière a été séparée avant de démonter l’appareil.
  6. Retirez les parois et les épingles et retirez délicatement la tranche sur une feuille stérile de panneau de liège à l’aide de gants.

6. Prélèvement de tissus

  1. Inspectez visuellement la coupe transversale et comparez-la avec l’image IRM axiale. Dans certains cas, la zone tumorale peut apparaître plus pâle que les tissus environnants.
  2. Palpez doucement la tranche transversale. Dans certains cas, la tumeur peut sembler plus ferme que les tissus environnants.
  3. À l’aide de l’image IRM axiale comme guide, sélectionnez une ou plusieurs zones pour l’échantillonnage.
  4. Prenez des poinçons de biopsie de la zone de tissu souhaitée.
    1. À l’aide d’un poinçon de 6 mm, appuyez sur la zone de tissu souhaitée.
    2. Tournez le poinçon de tissu sur place et contre le bouchon pour assurer une séparation complète et utilisez un scalpel bien aiguisé pour séparer si nécessaire.
    3. Retirez le poinçon et placez-le dans des tubes/moules si nécessaire en l’éjectant à l’aide du piston.
    4. Répétez l’opération pour d’autres échantillons tumoraux et bénins si nécessaire, avec des poinçons de biopsie stériles séparés. Enrez en rouge les trous où les poinçons ont été pris.
    5. Notez l’emplacement de chaque poinçon ainsi que le poids de la prostate et toute observation sur la couleur / fermeté des tissus.

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Résultats

figure-results-1
Figure 1 : Appareil de tranchage de la prostate.(A) Les parois sont insérées perpendiculairement à la base, et des broches dorées sont insérées dans la base entourant la prostate (prostate non illustrée). (B) Les lames parallèles remplaçables sont insérées dans la poignée de la lame. (C) Les lames passent entre les broches dorées afin de tranc...

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Poinçon de biopsie de 6 mmFisher Scientific13404607Poinçons de biopsie jetables pour prélever des échantillons de tissus de 6 mm
Encre noireLeica Biosystems3801753Marquage tissulaire et teinture de marge
Encre bleueLeica Biosystems3801751Marquage tissulaire et teinture de marge
Gant de main en cotte de maillesArco1456803Gants en cotte de mailles pour protéger la main lors du tranchage
Planche en liègeFisher Scientific12396447Panneau de liège pour fixer la prostate à la suite d’une procédure d’échantillonnage
AiguillesSLS (Fournitures de laboratoire scientifique)SYR6112Aiguilles stériles à utiliser pour épingler le tissu sur le panneau de liège après l’échantillonnage
Tranchage de la prostate aparatusInstitut de recherche sur le cancer, LondresNA - doit être obtenu dans le cadre de la MTAUn kit contenant la poignée de la trancheuse, les lames, l’entretoise, la base, les parois et les goupilles

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