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Toutes les procédures impliquant des animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. La dissection de l’appareil urogénital (UGS)
REMARQUE : Le schéma est présenté à la figure 1.
- Euthanasier une souris mâle C57BL/6 de 3 mois à l’aide de la méthode d’euthanasie par inhalation deCO2 ou d’une autre technique approuvée.
note: Des souris âgées de 3 à 12 mois peuvent être utilisées avec succès pour l’expérience. Les souris plus âgées (> 6 mois) auront probablement plus de graisse autour de l’UGS, qui devra être éliminée. L’identification et la séparation des lobes sont souvent difficiles chez les souris de moins de 3 mois. D’autres souches peuvent également être utilisées pour l’expérience.
- Placez la souris sur son dos et fixez les pattes à l’aide d’épingles de manière à ce que la face ventrale de l’animal soit exposée.
- Vaporisez de l’éthanol à 70 % sur l’abdomen de la souris et essuyez-le.
note: Il n’est pas nécessaire de raser les poils de l’abdomen avant la dissection.
- Soulevez la peau de l’abdomen, ainsi que la couche musculaire, à l’aide d’une paire de pinces émoussées moyennes et faites une incision en forme de Y inversé sur l’abdomen à l’aide de ciseaux.
- Tout d’abord, faites une incision droite avec une paire de ciseaux pointus juste au-dessus du pénis jusqu’au sternum (Figure 2a).
- Coupez de la base de l’incision vers chaque orteil, jusqu’aux cuisses (Figure 2b). Repliez la peau des deux côtés et du bas pour voir toute la région abdominale (Figure 2c-e).
note: La taille de coupe varie en fonction de l’âge et de la taille de la souris. La taille de l’incision droite initiale peut varier de 1,5 à 4 cm, selon la taille de la souris.
- Déplacez-vous sur les autres organes pour exposer l’UGS. Soulevez et déplacez les intestins brun-jaune (Figure 2f). Prenez les coussinets adipeux abdominaux (le tissu spongieux blanc opaque) à l’aide d’une pince et déplacez-les sur les côtés (Figure 2g).
note: L’UGS comprend les vésicules séminales, l’urètre, la prostate, le canal déférent (canal déférent) et la vessie. Il peut être identifié par la paire caractéristique d’arcs semi-circulaires blancs opaques (qui sont les vésicules séminales), avec le sac vésical rempli de liquide attaché à la base. Le tissu translucide situé juste sous les vésicules séminales est la prostate.
- Localisez l’UGS, tenez fermement la vessie à l’aide d’une pince émoussée et soulevez l’ensemble de l’UGS vers le haut à partir de l’abdomen de la souris.
note: Si la vessie est pleine, égouttez-la d’abord à l’aide d’une petite seringue pour mieux saisir avec la pince et réduire le risque de rupture de la vessie.
- En continuant à tirer sur la vessie, glissez une paire de ciseaux sous la vessie et la prostate jusqu’à la colonne vertébrale et faites une coupe. Coupez toutes les connexions restantes à la cavité abdominale (figures 2h et 2i). Veillez à ne pas couper trop près de l’UGS pour éviter de couper accidentellement le tissu de la prostate.
note: Lors de la coupe sous l’UGS, les ciseaux doivent être insérés tout le chemin à l’arrière de la souris, de sorte que la coupe casse également la colonne vertébrale. Cette méthode permet de couper presque toutes les connexions entre l’UGS et la cavité abdominale en un seul coup, réduisant ainsi le temps nécessaire pour extraire le tissu de la souris.
- Retirez l'UGS et placez-le dans 2 à 6 ml (suffisamment pour couvrir le tissu) de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) ou de milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM, glucose élevé) dans une boîte de Pétri de 6 cm (figures 2j et 2k) et déplacez-le vers un microscope de dissection (grossissement 10X).
note: Modifiez le support de dissection au fur et à mesure des étapes restantes.
