Article de méthode

Déparaffinisation et réhydratation de coupes de tissus : une procédure en deux étapes pour éliminer la cire de paraffine des lames de tissus FFPE suivie d’une réhydratation tissulaire

30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

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Source : Sugimoto, K. et al. Analyse à l’échelle du génome de la méthylation de l’ADN dans le cancer gastro-intestinal. J. Vis. Exp. (2020)

Dans cette vidéo, nous démontrons le traitement de coupes enrobées de FFPE ou de paraffine fixée au formol obtenues à partir de tissu tumoral gastro-intestinal. Les étapes de déparaffinisation et de réhydratation permettent le traitement de l’échantillon de tissu pour des applications analytiques ultérieures.

Protocole

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Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.

1. Lavage des lames

  1. Préparez 10 μm de coupes non colorées fixées au formol et noyées en paraffine (FFPE).
  2. Placez les lames dans un porte-lames en verre : utilisez environ 3 à 5 lames de section transversale les plus grandes, à moins que le tissu ne soit minime et que plus de lames ne soient nécessaires.
  3. Remplissez le support de diapositive de xylène et assurez-vous que tous les tissus de la lame sont immergés. Laisser reposer 15 min.
  4. Après 15 min, versez le xylène avec les lames maintenues avec une pointe de pipette afin que les lames ne tombent pas.
  5. Versez plus de xylène au même niveau qu’auparavant. Laisser reposer encore 15 min.
  6. Au bout de 15 min, versez à nouveau le xylène.
  7. Remplissez le support de diapositive avec de l’éthanol à 100 % (EtOH) et assurez-vous que tous les tissus de la lame sont complètement immergés. Laisser reposer 3 min.
  8. Videz l’EtOH tout en tenant soigneusement les lames. Rechargez au même niveau avec plus d’EtOH. Laisser reposer 2 min.
  9. Videz à nouveau l’EtOH et retirez la lame. Placez-les soigneusement face vers le haut sur une serviette en papier propre pour les faire sécher. Laisser reposer 10 min.

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
xylène Sigma-Aldrich214736
100 % éthanol Sigma-AldrichRéférence 24194

Réimpressions et autorisations

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Mots-clés

Traitement au xyl negradient d thanolcoupe de tissuspr paration histologiqued paraffinagetraitement des tissusporte lames

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