Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.
1. Coloration
- Avant de procéder à la coloration, essuyez tout excès de solution autour du tissu sur la lame avec du papier de soie.
- Placez les lames dans des conditions de température et d’humidité ambiantes pour éviter le dessèchement du tissu sur la lame tout au long du processus de coloration.
- Oxydez les lames avec quelques gouttes de permanganate de potassium pendant 5 min. Assurez-vous que le volume de permanganate de potassium est suffisant pour couvrir la section de tissu sur chaque lame.
- Rincez les lames oxydées à l’eau distillée dans un bocal Coplin avec 2-3 changements. Observez la couleur bleue du tissu.
- Maintenant, blanchissez ces lames en ajoutant quelques gouttes d’acide oxalique pendant 5 min. Assurez-vous que le volume d’acide oxalique est suffisant pour couvrir complètement la section de tissu sur chaque lame.
- Rincez les lames en les immergeant dans le bocal Coplin rempli d’eau distillée. Effectuez le rinçage 2x-3x.
- Maintenant, lavez brièvement ces lames dans de l’alcool à 95 %, puis plongez-les dans une solution d’élastine (5 g/L) pendant 8 à 24 h.
note: La solution d’élastine est volatile et son temps de coloration est relativement long, il est donc préférable d’immerger les lames avec une coloration élastique dans un récipient scellé, tel qu’une bouteille en verre transparent avec un bouchon d’étanchéité. La capacité du récipient et le volume de la solution d’élastine dépendent du nombre de lames immergées, à condition qu’elles permettent l’immersion complète de toutes les lames.
- Immergez ces lames directement dans de l’éthanol à 95 % pendant 1 à 2 min pour bien différencier chaque section de tissu.
note: La différenciation fait référence au changement de charge de la section du tissu, ce qui élimine l’excès de coloration absorbé par le tissu et rend les couleurs plus claires. Après la coloration à la solution d’élastine, les échantillons ne doivent pas être lavés à l’eau distillée pour éviter toute difficulté de différenciation. Vérifiez au microscope, si nécessaire, les fibres élastiques bleu-noir et le fond gris. Il est préférable de sous-différencier légèrement le tissu, car la contre-coloration de Van Gieson qui s'ensuit peut également extraire quelque peu la coloration élastique.
- Rincez complètement ces lames à l’eau distillée après différenciation.
- Contre-coloration des lames dans la solution de Van Gieson pendant 1 min.
note: Le volume de la solution de Van Gieson doit être suffisant pour pouvoir immerger complètement la section de tissu sur chaque lame.
