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1. Séparation des sphéroïdes SBNET
REMARQUE : Ceci est fait pour l’expansion et pour le partage avec d’autres chercheurs.
- À l’aide d’une pipette P1000, cassez mécaniquement l’ECM et aspirez l’ECM avec des sphéroïdes SBNET dans un tube stérile de 1,5 ml.
- Centrifugez à 1 000 x g à 4 °C, retirez tout le surnageant et placez le tube sur de la glace.
- Ajoutez 2 à 4 fois le volume du nouvel ECM à la pastille. Mélangez le nouvel ECM avec les anciens sphéroïdes ECM et SBNET en pipetant 10 fois de haut en bas, en évitant d’introduire des bulles d’air.
- Transférez 5 à 20 μL du mélange de sphéroïdes ECM et SBNET sur une nouvelle plaque et laissez ECM se solidifier.
- Couvrir avec un nouveau milieu SBNET et transférer dans l’incubateur. Le taux de récupération est d’environ 95 % à 100 %.
- Pour expédier des sphéroïdes SBNET vers un autre laboratoire, transférez les sphéroïdes SBNET avec un nouvel ECM dans un flacon T25 et laissez l’ECM se solidifier.
- Remplissez la fiole T25 avec du sphéroïde SBNET, vissez bien le bouchon et préparez le colis d’expédition.
- À la réception d’une culture de sphéroïdes SBNET, retirez le milieu de culture et effectuez les étapes 1.1 à 1.5 pour remettre les sphéroïdes SBNET en culture.