Séparation des sphéroïdes pour la sous-culture et l’expédition : une procédure de propagation et de transfert de sphéroïdes à partir d’une tumeur neuroendocrine de l’intestin grêle

Résumé

Source : Ear, P. H. et al. Établissement et caractérisation des sphéroïdes de la tumeur neuroendocrine de l’intestin grêle. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo démontre une stratégie de division et de propagation des sphéroïdes développés à partir de cellules tumorales neuroendocrines de l’intestin grêle. Ces sphéroïdes ont des marqueurs tumoraux neuroendocriniens de l’intestin grêle et peuvent être propagés et utilisés pour tester des médicaments anticancéreux.

Protocole

1. Séparation des sphéroïdes SBNET

REMARQUE : Ceci est fait pour l’expansion et pour le partage avec d’autres chercheurs.

1. À l’aide d’une pipette P1000, cassez mécaniquement l’ECM et aspirez l’ECM avec des sphéroïdes SBNET dans un tube stérile de 1,5 ml.
2. Centrifugez à 1 000 x g à 4 °C, retirez tout le surnageant et placez le tube sur de la glace.
3. Ajoutez 2 à 4 fois le volume du nouvel ECM à la pastille. Mélangez le nouvel ECM avec les anciens sphéroïdes ECM et SBNET en pipetant 10 fois de haut en bas, en évitant d’introduire des bulles d’air.
4. Transférez 5 à 20 μL du mélange de sphéroïdes ECM et SBNET sur une nouvelle plaque et laissez ECM se solidifier.
5. Couvrir avec un nouveau milieu SBNET et transférer dans l’incubateur. Le taux de récupération est d’environ 95 % à 100 %.
6. Pour expédier des sphéroïdes SBNET vers un autre laboratoire, transférez les sphéroïdes SBNET avec un nouvel ECM dans un flacon T25 et laissez l’ECM se solidifier.
7. Remplissez la fiole T25 avec du sphéroïde SBNET, vissez bien le bouchon et préparez le colis d’expédition.
8. À la réception d’une culture de sphéroïdes SBNET, retirez le milieu de culture et effectuez les étapes 1.1 à 1.5 pour remettre les sphéroïdes SBNET en culture.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DMEM	Gibco	Référence 11965-092	Milieu pour la préparation des tissus
DMEM/F-12	Gibco	Référence 11320-033	Milieu pour cultures d’organoïdes
FBS	Gibco	16000044	Réactif pour milieux de culture
glutamine	Gibco	A2916801	Réactif pour milieux de culture
insuline	sigma	I0516	Réactif pour milieux de culture
Matrigel	Corning	356235	Matrice à encastrer et à ancrer organoïdes
nicotinamide	sigma	Référence 72340	Réactif pour milieux de culture
STYLO/STREP	Gibco	Référence 15140-122	Réactif pour milieux de culture