Isolement péritonéal des neutrophiles de basse densité : une technique pour obtenir des neutrophiles de basse densité à partir d’un liquide de lavage péritonéal à l’aide du tri cellulaire activé magnétique

Résumé

Source : Kanamaru, R. et al. Les pièges extracellulaires à neutrophiles générés par les neutrophiles de faible densité obtenus à partir d’un liquide de lavage péritonéal favorisent la croissance et l’attachement des cellules tumorales. J. Vis. Exp. (2018)

Dans cette vidéo, nous décrivons la procédure d’isolement des neutrophiles de basse densité, ou LDN, du liquide de lavage péritonéal d’un patient humain postopératoire. Les LDN ainsi obtenus peuvent être utilisés dans d’autres expériences en aval pour comprendre leur rôle dans la croissance et la progression tumorales.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.

1. Isolement de la LDN à partir de lavages de cavité abdominale

1. Acquisition d’échantillons
   1. Perfuser 1 000 ml de solution saline stérile normale directement dans la cavité abdominale avant la fermeture de la plaie chez les patients qui ont subi une chirurgie abdominale en raison d’une tumeur maligne gastro-intestinale.
      note:

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ficoll-Paque PLUS	GE Healthcare, SUÈDE	Référence 17-1440-02
DirectÀ partir de™ microbilles CD66b de sang total	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	Tél. : 130-104-913
Bloc Fc	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	Tél. : 130-059-901
Solution de rinçage MACS	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	Tél. : 130-091-222
Solution 0,5 mol/l-EDTA (pH 8,0)	Nacalai tesque, Japon	Référence 06894-14
Solution mère MACS BSA	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	Tél. : 130-091-376
Colonnes LS	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	Tél. : 130-041-306
Séparateur magnétique MACS	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	Tél. : 130-042-501