Sectionnement, coloration et imagerie TEM d’exosomes intégrés : un protocole pour visualiser les caractéristiques structurelles des exosomes à l’aide de la TEM

Résumé

Source : Jung, M. K. et al. Préparation d’échantillons et imagerie d’exosomes par microscopie électronique à transmission. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo décrit la technique de préparation d’une lame mince d’exosomes intégrés. Ces sections peuvent ensuite être colorées et imagées à l’aide de la microscopie électronique à transmission, ou MET, pour étudier les caractéristiques structurelles des exosomes.

Protocole

1. Section des exosomes

1. Préparez le bloc d’exosomes en intégrant l’échantillon d’exosome purifié (obtenu à partir du surnageant de culture de cellules HCT116) dans un mélange d’enrobage pur à faible viscosité.
2. Sectionnez le bloc d’exosomes d’une épaisseur de 60 nm à travers un ultra-microtome.
3. Double coloration à l’acétate d’uranyle à 2 % pendant 20 min et au citrate de plomb pendant 10 min
   Pour une solution de plomb Reynolds, ajoutez 1,33 g de nitrate de plomb et 1,76 g de citrate de sodium à un total de 50 ml d’eau distillée.
4. Observez la grille sous microscopie électronique à transmission à 80 kV.
5. Cliquez sur « Acquérir », puis sur « Fichier » et « Enregistrer sous » dans le système de caméra CCD sous le microscope électronique à 80 kV. Suivez les réglages automatiques pour le temps d’exposition.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ultra-microtome	Leica	L’UCT
Acétate d’uranyle	Ems	Référence 22400	Produit chimique dangereux
Citrate de plomb	Ems	N° 17900
Microscopie électronique à transmission	Hitachi	N° H7600
Grille en nickel	Ems	G200-NI
Grille en cuivre	Ems	G200-Cu
Microscopie électronique à transmission	JEOL	JEM2200FS