Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Sleeve gastrectomie verticale et procédures simulées
- Le jour de la chirurgie, pesez les souris pour obtenir une mesure de poids de base.
- Équipez la salle d’opération d’un système d’anesthésie, d’un bain-marie chauffé et d’un coussin chauffant. Réglez le bain-marie à 37 °C et utilisez-le pour réchauffer une solution saline à 0,9 % pour l’irrigation. Nettoyez le champ opératoire avec de l’éthanol à 70 % et utilisez une technique stérile pour ouvrir le pack et les outils de chirurgie autoclavés.
note: Le coussin chauffant est utilisé pour garder l’animal au chaud pendant la chirurgie et la récupération après l’anesthésie.
- À l’aide d’une chambre d’induction, anesthésie la souris avec un débit d’isoflurane à 5 % et d’O2 de 1 L/min. Confirmez que la souris est dans le plan d’anesthésie approprié en effectuant un pincement des orteils. Maintenez la souris avec 1-3 % d’isoflurane et un débit d’O2 de 0,6 L/min une fois qu’un plan d’anesthésie cohérent a été atteint.
- Une fois la souris anesthésiée, placez une pommade oculaire (voir le tableau des matériaux) sur ses yeux pour les garder humides pendant l’opération. À ce moment, administrez également un analgésique, tel que le méloxicam (2 mg/kg par voie sous-cutanée). Coupez les poils de l’ombilic à l’aisselle en maintenant doucement la peau vers le bas pour fournir une tension.
- La peau de la souris étant fine et délicate, veillez à ne pas provoquer de lésions cutanées lors de la coupe des poils. Nettoyez la peau avec de la povidone iodée et de l’alcool.
- Enfilez des gants stériles et préparez le champ chirurgical stérile et les instruments. Effectuez le reste de la procédure en utilisant une technique stérile. Préparez le champ opératoire stérile en plaçant des champs chirurgicaux stériles de chaque côté de la souris. Utilisez du papier d’aluminium autoclavé pour créer un champ chirurgical pour la souris.
- Découpez un petit trou dans le papier d'aluminium pour permettre l'accès à l'abdomen de la souris.
- Faites une incision de la peau du milieu de l’abdomen (ombilic) jusqu’au niveau du cartilage xiphoïde à l’aide d’un ciseau à iris. Identifiez la linea alba et utilisez des ciseaux à iris pour couper la paroi du corps le long de la linea alba. Utilisez des CTA pour élever doucement l’estomac hors de l’abdomen, puis disséquez brutalement le grand épiploon de la plus grande courbure de l’estomac.
- Ligaturez l’artère gastrique courte qui relie le fond de l’estomac et la rate en plaçant deux ligatures à l’aide d’une suture résorbable monofilament 7-0. Utilisez des ciseaux à ressort pour couper entre les deux ligatures. Une fois l’artère transectée, extériorisez complètement l’estomac de la cavité abdominale. Placez de la gaze sous l’estomac et mouillez-la avec une solution saline pour garder le tissu humide.
- Pour la procédure VSG, ligaturez les branches proéminentes de l’artère et de la veine gastriques avec une suture résorbable monofilament 7-0 avec une aiguille conique en utilisant 3 lancers pour chaque nœud. Placez les ligatures juste en dessous (c’est-à-dire vers la moindre courbure de l’estomac) de la ligne de tranquillisation prévue.
note: La ligne de section prévue commence à ~2 mm au-dessus (c’est-à-dire vers la plus grande courbure de l’estomac) de l’encoche cardiaque de l’estomac et au moins 2 mm au-dessous du margo pilcatus et s’étend jusqu’à l’extrémité proximale du lobe droit du pancréas. En règle générale, il y a 4 vaisseaux par paroi gastrique qui doivent être ligaturés ; Cependant, cela peut varier d’une souris à l’autre.
- Pour éviter le déversement du contenu gastrique pendant la gastrectomie, placez une simple ligne continue de suture passant à travers les deux parois gastriques juste en dessous de la ligne de section prévue à l’aide d’une suture résorbable monofilament 6-0 avec une aiguille conique. Commencez la ligne de suture à la droite du chirurgien de l'œsophage et sous le margo pilcatus et terminez juste au-dessus du pancréas.
- Placez les hémostatiques à pointe mince au-dessus de la ligne de suture et utilisez des ciseaux à ressort pour couper entre la ligne de suture et les hémostats. Retirez le tissu gastrique transecté du champ opératoire stérile. Utilisez des CTA pour nettoyer le sang et la digestion de l’estomac.
- Renforcez l’apposition des parois gastriques à l’aide d’une suture résorbable monofilament 6-0 avec une aiguille conique à l’aide d’un motif discontinu simple.
note: Un modèle de suture discontinu simple est recommandé car il offre une fermeture plus sûre que le modèle de suture continue simple.
- Rincez le reste gastrique avec une solution saline tout au long de la procédure afin de garder les tissus humides et propres. À l’aide d’une aiguille à gavage de 20 G attachée à une seringue de 20 ml, effectuez un lavage gastrique avec une solution saline. Utilisez cette taille pour vous assurer qu’une pression adéquate est fournie sans risquer de lésions du tissu gastrique dues à une pression excessive ou de lésions accidentelles du tissu gastrique dues à l’utilisation d’une aiguille pointue ordinaire.
- Utilisez un minimum de 20 nœuds pour fermer solidement l’estomac ; faites attention à la fermeture le long de la face œsophagienne, car cette face est plus difficile d’accès et est donc souvent un site de déhiscence.
- Assurez-vous qu’il n’y a pas de fuites en appuyant doucement sur le ventre avec des CTA. Si des fuites sont identifiées, placez des nœuds discontinus simples supplémentaires sur les zones de fuite, puis testez à nouveau l’étanchéité. Testez l’étanchéité jusqu’à ce qu’aucune fuite ne soit détectée.
- Faites un dernier lavage complet de l’estomac à l’aide d’au moins 60 ml de solution saline pour vous assurer qu’aucune matière particulaire infectieuse n’a été laissée derrière.
- Replacez l’estomac dans la cavité abdominale sous le foie à l’aide d’une TDM. Placez les CTA le long de la face dorsale de la cavité abdominale pour absorber tout excès de liquide. À l'aide d'une aiguille 18G émoussée, injecter la solution de Ringer lactate (LRS) avec ou sans antibiotiques (0,5 mL LRS +/- 20 mg/kg d'enrofloxacine) directement dans la cavité abdominale, juste avant la fermeture.
note: Cela remplace la perte de liquide subie pendant la chirurgie et fournit une méthode d’application directe d’antibiotiques sur le site chirurgical pour aider à la récupération.
- Fermez la couche musculaire abdominale à l’aide d’une suture résorbable monofilament 6-0 avec une aiguille conique selon un motif discontinu simple. Ensuite, fermez la couche cutanée avec une suture résorbable monofilament 6-0 selon un motif continu simple.
- Placez de l’adhésif tissulaire sur la peau et repliez la peau sur la ligne de suture pour enterrer la suture afin que la souris ne puisse pas perturber la fermeture de la plaie après l’opération.
- Éteignez l’isoflurane et laissez la souris récupérer sur le coussin chauffant pendant 10 à 15 minutes avant de la remettre dans sa cage d’origine. Ne laissez pas l’animal sans surveillance jusqu’à ce qu’il ait repris conscience et qu’il soit capable de bouger.
- Gardez les animaux logés individuellement jusqu’à ce qu’ils soient complètement rétablis de l’opération.
note: Si l’on veut obtenir des mesures précises de l’apport alimentaire tout au long de l’étude, les souris doivent continuer d’être logées individuellement tout au long de l’étude. Il existe un risque d’obstruction par un corps étranger en mangeant de la litière de cage domestique. Les animaux doivent être logés dans des cages exemptes de litière, à l’exception des matériaux de nidification destinés à l’enrichissement (voir le tableau des matériaux).
