Extraction des muscles squelettiques des membres postérieurs : une procédure pour exciser les muscles squelettiques des membres postérieurs à partir d’un modèle murin

Résumé

Source : Bonetto, A. et al. La souris porteuse d’une tumeur de carcinome du côlon 26 comme modèle pour l’étude de la cachexie cancéreuse. J. Vis. Exp. (2016)

Dans cette vidéo, nous décrivons la procédure d’excision des muscles squelettiques des membres postérieurs à partir d’un modèle murin. Les muscles excisés peuvent être stockés à des températures plus basses jusqu’à une analyse ultérieure en aval.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Excision de tissus et d’organes

REMARQUE : Pour l’utilisation de tissus dans des tests de biologie biochimique ou moléculaire, prévoyez de peser chaque organe et tissu et de placer immédiatement un fragment dans des cryotubes pré-étiquetés. Congeler dans de l’azote liquide et conserver à -80 °C.

1. Afin d’éviter la contamination des échantillons de tissus par la fourrure, vaporisez de l’éthanol à 70 % sur l’ensemble du corps.
2. Placez la souris sur un lit de dissection en position couchée et étendez un membre verticalement en fixant le pied à une pince à burette surélevée.
3. Saisissez la peau du membre inférieur à l’aide d’une pince Dumont et utilisez les ciseaux fins incurvés pour retirer délicatement la peau et le fascia, exposant ainsi les muscles ventraux sous-jacents du membre inférieur.
4. Identifier le muscle gastrocnémien sur le membre inférieur postérieur par son origine au niveau des condyles latéraux et médiaux du fémur postérieur et son insertion au niveau du calcanéum via le tendon calcanéen.
   1. Procédez à la coupe du tendon calcanéen gastrocnémien. Saisissez l’extrémité distale du gastrocnémien à l’aide d’une pince de Dumont et tirez le ventre musculaire vers son origine. À l’aide de ciseaux, coupez le muscle à l’origine le plus près possible du fémur. Placez le muscle dans un plat. Pesez-le immédiatement et congelez-le dans un tube dans de l’azote liquide.
      note: Assurez-vous de ne pas exciser le muscle soléaire en même temps que le gastrocnémien. Si cela se produit, retirez délicatement le soléaire en le tirant doucement avec la pince.
5. Procéder à l’identification et à l’excise du muscle tibial antérieur à partir de son origine à la surface antérolatérale du tibia et de son insertion au niveau du cunéiforme médial via son tendon distal.
   1. Afin d’avoir un effet de levier, tenez le pied en saisissant les doigts avec l’index et le pouce. Insérez l’extrémité de la pince Dumont immédiatement sous le tendon distal superficiel du tibial et déplacez la pince de manière à ce que le côté émoussé puisse être utilisé pour détacher le muscle tibial du ventre du tissu conjonctif sous-jacent.
   2. Coupez le tendon distal à l’aide des ciseaux fins et incurvés puis coupez le muscle à l’origine au plus près du tibia.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
souris CD2F1	Harlan	60
Appareil d’anesthésie	EZ-Anesthésie	EZ-7000
opo	Tissu-Tek	Réf. 4583
cryostat	Leica	CM1850
Disques en liège	Sciences de la microscopie électronique	Référence 63305
Microtainer	Bd	365873
Toboggans en verre Superfrost plus	VWR	Référence 48311-703
Streptomycine-Pénicilline	Cellgro	30-002-CI