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Article de méthode
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30 avril 2023
Source : Teal, E. et al. Culture monocouche épithéliale gastrique primaire dérivée de souris et d’homme pour l’étude de la régénération. J. Vis. Exp. (2018)
Cette vidéo décrit une méthode pour isoler les cellules épithéliales gastriques du tissu fundique humain. Les cellules épithéliales isolées peuvent être utilisées comme modèle in vitro pour étudier leurs rôles régulateurs dans la physiologie et la physiopathologie gastriques.
Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.
1. Établissement d’organoïdes fundiques gastriques 3D d’origine humaine
REMARQUE : Pour éviter toute contamination, effectuez le protocole dans son intégralité à l’intérieur d’une hotte de culture de tissus stérile. Du tissu fundique humain a été prélevé chez des patients subissant une sleeve gastrectomie.
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| DPBS sans Ca2+/Mg2+ | pêcheur | 21-031CV | |
| Gaze stérile | |||
| Pince hémostatique incurvée | |||
| Boîte de Pétri stérile | |||
| Lames de rasoir stériles | |||
| Milieu avancé Dulbecco's Modified Eagle/F12 (média basal) | Technologies de la vie | Référence 12634-010 | |
| Pénicilline/streptomycine | Thermo Scientific | SV30010 | |
| Amphotéricine B/Gentamicine | Thermo Scientific | Réf. R01510 | |
| GlutaMAX (L-glutamine) | Technologies de la vie | Référence 25030-081 | |
| kanamycine | Thermo Fisher | RO1510 | |
| Collagénase de type 1 | Worthington | LS004214 | |
| Albumine sérique bovine | Sigma Aldrich | A9418 | |
| Tampon HEPES | Sigma Aldrich | N° H0887 | |
| Fiole à fond rond de 125 mL | |||
| Barre d’agitation de 1 po (25 mm) | |||
| Septa en caoutchouc | |||
| 20G Aiguilles spinales de 3,5 po de longueur | Thermo Fisher | 405182 | |
| Kimwipes (papier de soie) | Fischer Scientific | 06-666C | |
| Réservoir d’oxygène avec tuyau en caoutchouc | |||
| Pinces de support d’anneau | |||
| 37 °C Bain-marie | |||
| 5 mL Tubes à essai de culture cellulaire | pêcheur | 14-956-3C |
