Xénogreffe tumorale dérivée d’un patient : une technique pour générer un modèle murin expérimental pour évaluer le carcinome à cellules urothéliales

Dans cet article

Résumé

Source : Moret, R. et al. Modèles de xénogreffes orthotopiques dérivées de patients pour la croissance tumorale et les métastases spontanées du carcinome à cellules urothéliales humaines et du cancer colorectal. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo décrit la procédure de génération d’un modèle murin expérimental de xénogreffe, qui peut être utilisé pour étudier la progression du carcinome à cellules urothéliales.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Modèle de souris UCC

Préparation des souris pour la procédure
1. Obtenez une souris NOD/SCID femelle âgée de 6 à 8 semaines. Rasez le bas du dos de la souris à l’aide d’une crème dépilatoire. Anesthésier la souris dans une chambre d’induction avec de l’isoflurane (2,5 % dans 100 % d’oxygène, 1 L/min).
2. Une fois sous sédation, placez la souris en position couchée avec son museau dans un cône nasal d’isoflurane et son dos nu fermement ancré sur une électrode dispersive.
  REMARQUE : La souris est complètement sous sédation si elle ne répond pas au pincement des orteils.
Prenez les cellules tumorales UCC récoltées et mettez-les en suspension dans un milieu RPMI de 50 μL. Instiller les cellules UCC dans la vessie à l’aide d’un angiocathéter (Figure 1Aa, Ab).
1. Installez un appareil d’électrocautérisation monopolaire et réglez-le sur une puissance de 4 W. Lubrifiez un angiocathéter stérile de 24 G avec de la gelée lubrifiante et insérez-le dans l’urètre de la souris femelle.
  REMARQUE : Une légère résistance peut être ressentie. Poussez doucement vers l’avant ou retirez l’angiocathéter et répétez l’opération. Si le cathéter se plie à l’entrée, insérez un fil-guide stérile à mi-chemin dans le cathéter pour assurer la stabilité.
2. Insérez complètement le fil-guide droit à âme fixe de 0,025" à 1 mm de l’extrémité de l’angiocathéter.
  REMARQUE : Le fil est marqué avec du ruban adhésif avant la procédure pour indiquer le point d’arrêt de 1 mm et assurer la cohérence.
3. Maintenez la goupille monopolaire sur le fil-guide pendant 1 s, ce qui permet une irritation électrique de la muqueuse de la vessie.
4. Fixez un angiocathéter stérile frais à une seringue Luer-Lok de 1 cc et prélevez 200 μL de cellules collectées.
  REMARQUE : Au moins 100 μL sont perdus de l’angiocathéter vers la seringue. Compenser le volume de perte lors du calcul du volume de suspension cellulaire nécessaire.
5. Retirez le fil-guide et l’angiocathéter de l’urètre de la souris. Insérez l’angiocathéter avec la seringue de cellules attachées dans l’urètre.
  REMARQUE : L’avancement devrait être plus facile qu’auparavant.
6. Instillez 50 μL de cellules dans la vessie de la souris. Attendez quelques secondes avant de retirer l’angiocathéter pour permettre aux cellules d’adhérer à la paroi de la vessie.
  REMARQUE : Les cellules restent dans la vessie et se développent en une tumeur primaire.

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Résultats

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Figure 1 : Modèles de souris UCC orthotopiques. (aa) Un angiocathéter a été inséré dans la vessie d’une souris femelle NOD/SCID et un choc électrocautérisé a été appliqué sur la paroi de la vessie via un fil-guide. (Ab) Des cellules tumorales UCC marquées à la luciférase, BlCaPt15 (2 x 10⁴ cellules) ou BlCaPt37 (5 x 10⁵ cellules) avec l’a...