Préparation d’un rein de rat décellularisé : une procédure pour générer un échafaudage acellulaire vascularisé d’un organe entier à partir d’un rein de rat récolté

Résumé

Source : Kim, E. H. et al. Préparation d’échafaudages rénaux décellularisés chez le rat. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo décrit la préparation d’un rein de rat décellularisé. L’échafaudage vasculaire acellulaire obtenu peut servir de plate-forme prometteuse pour l’ingénierie tissulaire des greffes d’organes.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Prélèvement et décellularisation des reins

1. Récoltez le rein gauche avec l’aorte abdominale et la veine cave inférieure.
2. Lister l’uretère, l’aorte thoracique, la veine cave supérieure et les branches de l’aorte abdominale.
3. Gardez l'organe hydraté dans le PBS de Dulbecco (DPBS) dans une boîte de Pétri de 10 cm.
4. Canuler l’aorte abdominale et la veine cave inférieure avec un cathéter 23G. Pour éliminer le sang résiduel, connectez la canule à l’aide d’une pompe péristaltique et lavez-la avec du DPBS (500 ml) et de l’héparine 16 U/mL pendant 90 minutes à un débit de 5 tr/min à 37 °C.
5. Pour décellulariser le rein, perfuser le rein avec du Triton X-100 à 1 % (1 L) pendant 3 h, puis avec une solution de dodécylsulfate de sodium (SDS) à 0,75 % (2 L) pendant 6 h à une pression constante de 40 mmHg.
   note: Le rein deviendra transparent au bout de 8 heures.
6. Pour éliminer les FDS résiduels, perfuser l’échantillon avec de la pénicilline à 1 % dans de l’eau distillée (6 L) pendant 18 h (toute la nuit), puis avec du DPBS stérile (500 mL) et de l’héparine à 16 U/mL pendant 90 min.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tube en polyéthylène 50, tube de cathéter 100 pi	Braintree Scientific	.023 » × .038 »
3-0 Bobine de soie Accès vasculaire / Ligature chez le rat	Braintree Scientific	SUT-S 110
Ciseaux fins pour couper le fascia / tissu conjonctif	Outils scientifiques fins	Référence 14058-09
Aiguille de guidage de 25 pouces (pour cathéters vasculaires)	Becton Dickinson	305145
Pinces vasculaires Schwartz microserrefine	Outils scientifiques fins	18052-01 (droit)
5-0 Bobine de soie Accès vasculaire / Ligature chez la souris	Braintree Scientific	SUT-S 106