Préparation de blocs de sphéroïdes cancéreux par congélation instantanée : une procédure pour préserver les sphéroïdes cancéreux dans des blocs de matrice congelés

Résumé

Source : Wang, Y. et al. 3-D pour l’étude de l’invasion et l’évaluation des traitements dans le cancer de la vessie. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo montre la préparation de blocs de sphéroïdes cancéreux par congélation éclair, une technique dans laquelle un échantillon de tissu d’intérêt est congelé à une température ultra-froide, en retenant les sphéroïdes à l’intérieur de la matrice.

Protocole

1. Préparation d’un bloc d’échantillon contenant des sphéroïdes cancéreux pour la coupe de tissus congelés

1. Soulevez avec précaution le bloc de gel de collagène et les sphéroïdes des lames de la chambre à l’aide de petites pinces. Placez le bloc de gel de collagène dans un moule d’histologie en plastique.
2. Rincez brièvement le gel de collagène avec 1x PBS, puis fixez-le avec du paraformaldéhyde (PFA) à 4 % dans du PBS pendant 30 min à température ambiante.
   note: Le PFA est un cancérogène potentiel et doit être manipulé avec précaution.
3. Lavez le gel de collagène avec 1,5 ml de 1x PBS sur un shaker pendant 15 min. Remplacez le PBS et répétez l’étape de lavage précédente 3x.
4. Appliquez une fine couche (environ 3 mm) de composé à température de coupe optimale (OCT) pour couvrir le fond d’un nouveau moule d’histologie en plastique. Placez le gel de collagène fixé et lavé sur le composé OCT, puis intégrez soigneusement l’ensemble du gel en remplissant le moule avec du composé OCT tout en évitant la formation de bulles d’air dans l’OCT.
5. Laisser le moule à 4 °C pendant 1 h.
6. Placez le moule contenant l’échantillon et le composé OCT sur une boîte de Pétri de 100 mm flottant sur de l’azote liquide. Laissez l’échantillon geler complètement.
7. Conservez le bloc d’échantillon congelé à -80 °C pour une utilisation future.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Milieu de culture cellulaire DMEM	Thermo Fisher Scientific	11995065
Sérum fœtal bovin	Thermo Fisher Scientific	26140079
Antibiotique-Antimycosique (100x)	Thermo Fisher Scientific	15240062
Albumine sérique bovine (BSA)	Sigma-Aldrich	A3803
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS) pH 7,4	Thermo Fisher Scientific	10010023
Collagène de type 1 de la queue de rat, élevé concentration	Corning	354249
Nunc Lab-Tek II Chambré Couvre-objet	Thermo Fisher Scientific	155382
Solution de paraformaldéhyde	Sciences de la microscopie électronique	Référence 15710
Composé O.C.T	Thermo Fisher Scientific	23730571