Appauvrissement de l’urine et rinçage de la vessie dans un modèle murin : une procédure basée sur un cathéter pour vider et laver la vessie urinaire murine

Résumé

Source : Yu, C. et al. Nouvelle méthode d’administration de l’ADN plasmidique à l’urothélium de la vessie de souris par électroporation. J. Vis. Exp. (2018)

Dans cette vidéo, nous décrivons une procédure basée sur un cathéter pour vider et rincer la vessie d’un modèle murin. La souris préparée peut ensuite être utilisée pour d’autres procédures expérimentales.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Anesthésie animale

1. Utilisez un système d’anesthésie de table pour anesthésier l’animal avec de l’isoflurane. Allumez le réservoir O₂ et réglez le débitmètre d’oxygène à 1 L/min.
2. Placez une souris femelle adulte C57BL/6J dans la chambre d’induction. Allumez et réglez le vaporisateur d’isoflurane à 3 % pour l’induction. La souris doit être anesthésie dans les 2 minutes. Administrer l’analgésique buprénorphine (0,1 mg/kg) par voie sous-cutanée après avoir retiré la souris de la chambre d’induction pour l’analgésie préventive.
   note: Dans ce protocole, des souris femelles sont utilisées, car elles sont plus faciles à travailler lors du cathétérisme de l’urètre. Le protocole fonctionne également pour les souris mâles, mais une prudence supplémentaire est nécessaire.
3. Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux de l’animal pour prévenir le dessèchement. Placez la souris anesthésiée vers le haut sur un coussin chauffant avec son nez dans le cône nasal. Tournez l’interrupteur du circuit d’air pour laisser passer l’isoflurane à travers le cône de nez.
4. Fixez la tête et le cône nasal avec du ruban adhésif. Ajustez le vaporisateur d’isoflurane à 2 % pour l’entretien.
5. Maintenez les membres avec du ruban adhésif. Effectuez des tests de pincement des orteils pour vous assurer que l’animal est sous anesthésie profonde, puis rasez la région abdominale.

2. Épuisement de l’urine et rinçage de la vessie

1. Appliquez du lubrifiant sur le cathéter (24G, longueur de 2,11 cm, diamètre extérieur de 0,045 cm) et assurez-vous que sa surface extérieure est entièrement couverte.
2. Insérez le cathéter dans l’ouverture de l’urètre et poussez-le lentement jusqu’à ce qu’il atteigne la vessie, moment auquel l’urine devrait s’écouler par le cathéter. Appuyez doucement sur l’abdomen pour aider à l’épuisement de l’urine.
   1. Vérifiez si le cathéter est correctement inséré dans la vessie en observant l’écoulement automatique de l’urine. Évitez de percer l’urètre et la paroi de la vessie et appliquez du lubrifiant plusieurs fois si nécessaire.
3. Jetez l’urine à l’aide d’une pipette dans un bécher
.
4. Pipeter 80 μL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) dans l’extrémité externe du cathéter, l’autre extrémité restant dans la vessie. Fixez soigneusement une seringue de 1 ml au cathéter. Poussez doucement la seringue pour injecter le PBS dans la vessie. Laissez un peu de PBS dans le cathéter pour éviter de créer des bulles d’air dans la vessie.
5. Retirez la seringue. Attendez que le PBS s’écoule de la vessie. Appuyez doucement sur l’abdomen pour évacuer le PBS.
6. Jetez le PBS dans le cathéter à l’aide d’une pipette dans le bécher.
7. Répétez le lavage PBS (étapes 2.4 à 2.6) deux fois de plus.
   note: Il est essentiel de travailler en douceur lors de ces étapes de lavage. La présence de sang dans le cathéter ou l’échec de l’écoulement automatique du liquide indique généralement que l’urètre est percé

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringue BD 1mL TB	pêcheur	Référence 148232E
Cathéters I.V. jetables Exel International Safelet	Fisher Scientific	Tél. : 14 841-21	24G, 2,11 cm de longueur, 0,045 cm de diamètre extérieur
K&H Tapis de repos chauffé pour petits animaux, 9 x 12 pouces	amazone		Couvrez le tapis chauffant avec du papier absorbant
Pommade ophtalmique	pêcheur	NC0849514
PBS, pH 7,4	Technologies de la vie	10010049
Pointes de pipette 200 μL	Scientifique américain	Référence 1111-0206
Pommade ophtalmique	pêcheur	NC0849514
Pointes de pipette, ajustement universel ; 0,1 à 10 μL	pêcheur	02707438(CS)
Buprénorphine	sigma	B9275-50MG
PIPETMAN NEO P2	Gilson	F144561
PIPETMAN NEO P200N	Gilson	F144565
Lubrifiant vétérinaire Therio-gel	PBS santé animale	353 à 736
V-1 Anesthésie du système de table	VetEquip	901806
L’isoflurane	Un vétérinaire	501017
Ruban, Scotch	pêcheur	19047257