Administration de plasmides d’ADN dans l’urothélium de la vessie de souris : une procédure basée sur l’électroporation pour administrer efficacement des plasmides d’ADN dans les cellules urothéliales de la vessie murine afin de générer des modèles génétiquement modifiés

Résumé

Source : Chuan, Y. et al. Nouvelle méthode d’administration de l’ADN plasmidique à l’urothélium de la vessie de souris par électroporation. J. Vis. Exp.(2018)

Cette vidéo démontre l’administration du plasmide d’ADN dans l’urothélium de la vessie de souris à l’aide d’une combinaison de techniques de cathétérisme urétral et d’électroporation. La procédure décrite permet de générer des modèles de cancer de la vessie chez la souris.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation des plasmides et des outils

1. Pour chaque vessie à transfecter, préparez au moins 20 μL de plasmide d’ADN (1 μg/μL).
2. Ajouter 1 μL de Trypan Blue aux 20 μL de solution plasmidique dans un tube de microcentrifugation de 1,5 mL. Pipette pour bien mélanger.
3. Autoclavez tous les instruments chirurgicaux et stérilisez l’espace de travail avec de l’éthanol à 70 %. Vaporisez fréquemment les instruments chirurgicaux et l....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringue BD 1mL TB	pêcheur	Référence 148232E
Buprénorphine	sigma	B9275-50MG
Pince à épiler Dumont	Roboz Institut chirurgical	RS-5005	Traiter avec de l’éthanol à 70 % avant une utilisation chirurgicale
ECM830 SQ Électroporateur d’ondes	Appareil de Harvard	450052
Cathéters I.V. jetables Exel International Safelet	Fisher Scientific	Tél. : 14 841-21	24G, 2,11 cm de longueur, 0,045 cm de diamètre extérieur
Micro-ciseaux de dissection extra fins	Roboz Institut chirurgical	RS-5135	Traiter avec de l’éthanol à 70 % avant une utilisation chirurgicale
L’isoflurane	Un vétérinaire	501017
K&H Tapis de repos chauffé pour petits animaux, 9 x 12 pouces	amazone		Couvrez le tapis chauffant avec du papier absorbant
Pommade ophtalmique	pêcheur	NC0849514
PBS, pH 7,4	Technologies de la vie	10010049
Pointes de pipette 200 μL	Scientifique américain	Référence 1111-0206
Pointes de pipette, ajustement universel ; 0,1 à 10 μL	pêcheur	02707438(CS)
PIPETMAN NEO P2	Gilson	F144561
PIPETMAN NEO P200N	Gilson	F144565
plasmide CAG-GFP	Addgene	Référence 16664
Pince à épiler platine 5 mm	Appareil de Harvard	450489	5 mm de diamètre
ciseaux	Roboz Institut chirurgical	RS-5880	Traiter avec de l’éthanol à 70 % avant une utilisation chirurgicale
Cordon de ficelle	amazone		Mandala Crafts 150D 210D 0.8mm 1mm cuir couture couture fil ciré plat cordon de ficelle
Ruban, Scotch	pêcheur	19047257
Lubrifiant vétérinaire Therio-gel	PBS santé animale	353 à 736
Teinture Bleu Trypan	Technologies de la vie	15250061
V-1 Anesthésie du système de table	VetEquip	901806
Suture violette Vicryl 18" FS-2 coupe 5-0	pêcheur	NC0578475
Walgreens Povidone Iode 10 %	Walgreens	953982
Clip de plaie	pêcheur	Référence 18045
Applicateur de clip de plaie	pêcheur	1804