Coloration périodique à l’acide de Schiff ou PAS : une méthode pour évaluer les déformations structurelles du glomérule

1. Coloration de Schiff acide périodique (PAS)

REMARQUE : La coloration PAS mettra en évidence les membranes basales des anses capillaires glomérulaires et l’épithélium tubulaire. Il permet une visualisation détaillée des cellules glomérulaires, de la matrice mésangiale et de l’expansion potentielle, ainsi que des modifications potentielles du GBM (c’est-à-dire l’épaississement et les irrégularités).

1. Sectionnez le cortex rénal fixé par le PFA et intégré à la paraffine à l’aide d’un microtome de 5 m d’épaisseur sur des lames enrobées de poly-L-lysine. Sécher à 37 °C pendant 1 h. Assurez-vous que la section ne contient pas de plis ou de trous, qui pourraient déformer la morphologie au microscope.
2. Déparaffiniser les lames en les incubant deux fois dans du xylène (ATTENTION, irritant ; à utiliser dans une sorcelle) pendant 3 minutes chacune, deux fois dans de l’EtOH à 100 % pendant 3 minutes chacune, puis une fois dans 95 %, 70 % et 50 % d’EtOH pendant 3 minutes chacune, le tout à température ambiante. Réhydratez les lames en dH₂O.
3. Incuber les lames dans une solution acide périodique (ATTENTION, irritant ; utiliser dans une sorbonne) (1 g/dL) pendant 5 min, puis rincer les lames en plusieurs changements de dH₂O. Utiliser un récipient contenant 100 mL de dH₂O à température ambiante.
4. Incuber les lames dans le réactif de Schiff (Parasoaniline HCl 6 g/L et métabisulfite de sodium 4 % dans HCl 0,25 mol/L) pendant 15 min à température ambiante. Lavez les lames à l’eau courante du robinet pendant 5 min.
5. Contre-colorer avec de l’hématoxyline pendant 3 s avant de rincer abondamment les lames à l’eau courante du robinet pendant 15 min
   note: Une certaine optimisation peut être nécessaire pour déterminer le moment optimal pour la coloration à l’hématoxyline.
6. Déshydrater les lames en utilisant l’inverse du protocole de déparaffinisation. Terminez par du xylène.
7. Faites sécher les diapositives à l’air libre et montez-les avec un support de montage à base de xylène.
8. Image au microscope optique à un grossissement de 400X pour évaluer les structures glomérulaires. Évaluez les éléments suivants : épaississement et irrégularités du GBM, effondrement des anses capillaires, tissu fibrotique, sclérose, prolifération cellulaire (cellules endothéliales, podocytaires et mésangiales, ou inflammatoires infiltrant la touffe).
   note: Pour une évaluation complète de la physiopathologie glomérulaire, les lésions situées ailleurs dans le rein doivent être évaluées, comme dans les tubules.