Cryoconservation du cerveau murin par congélation instantanée : une technique pour congeler rapidement un échantillon entier de cerveau de souris pour une analyse histologique

Résumé

Source : Comba, A. et al. Microdissection par capture laser des sous-régions de gliome pour la caractérisation spatiale et moléculaire de l’hétérogénéité intratumorale, des oncoflux et de l’invasion. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo démontre la cryoconservation du cerveau d’une souris pour isoler des zones anatomiques discrètes ou des populations cellulaires spécifiques des tissus tumoraux. Cette technique est essentielle pour obtenir une résolution optique optimale de la morphologie du tissu cérébral pour une analyse ultérieure.

Protocole

1. Cryoconservation des cerveaux porteurs de tumeurs gliomaques

1. Avant de cryoconserver les cerveaux, préparez un bocal rempli d’isopentane/2-méthylbutane froid et placez-le dans un récipient rempli d’azote liquide. Laissez refroidir le solvant.
2. Retirez le cerveau de la solution de saccharose à 30 % et séchez-le sur un papier filtre.
3. Étiquetez le cryomoule avec un marqueur permanent. Ajoutez soigneusement environ 5 ml d’OCT (composé à température de coupe optimale) au centre du cryomoule, en évitant les bulles d’air.
4. Placez le cerveau dans un cryomoule contenant de l’OCT dans l’orientation souhaitée. Remplissez le moule d’OCT jusqu’à ce que le cerveau soit complètement immergé. À l’aide d’une pince propre, placez rapidement le cryomoule avec l’OCT et le cerveau dans l’isopentane/2-méthylbutane froid.
5. Une fois que l’OCT se solidifie (~30–40 s), retirez le cryomoule avec le cerveau et placez-le dans de la glace sèche. Ne laissez pas le moule contenant le cerveau dans du 2-méthylbutane au-delà de 2 minutes car cela pourrait provoquer des fissures dans l’OCT solide. Enveloppez le cryomoule avec le cerveau dans une feuille d’aluminium et stockez-le à -80 °C.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Moules d’enrobage jetables Peel Away	Sciences de la microscopie électronique	Référence 70182
Cryostat de recherche	Leica	CM3050s
Composé Tissue-Plus O.C.T.	Fisher Scientific	Tél. : 23-730-571