Isolement de l’épithélium des papilles circonvallates (CVP) à partir d’un modèle murin : une procédure enzymatique pour séparer l’épithélium CVP de la langue de souris

Résumé

Source : Shechtman, L. A. et al. Génération et culture d’organoïdes linguaux dérivés de cellules souches de goût de souris adultes. J. Vis. Exp. (2021)

Dans cette vidéo, nous décrivons l’isolement de l’épithélium des papilles circonvallées (CVP) à partir d’une langue murine.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Isolement de l’épithélium CVP

1. Euthanasier les souris par asphyxie au CO₂ conformément à la réglementation de l’IACUC, suivie d’une méthode secondaire approuvée telle que la thoracotomie bilatérale, la luxation cervicale, la décapitation ou l’exsanguination.
2. Utilisez de grands ciseaux de dissection stériles pour couper les joues et casser la mâchoire. Soulevez la langue et coupez le frein lingual pour séparer la langue d....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringue de 1 mL de TB	Seringue BD	309659
Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco avec Ca²⁺ et Mg²⁺	Gibco	Référence 10010-023
Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco avec Ca²⁺ et Mg²⁺	Sigma Sciences de la Vie	D8662-500ML
Pince Dumont #5	Outils scientifiques fins	Référence 11252-30
Sérum fœtal bovin (FBS)	Gibco	Référence 26140-079
Seringue de 1 mL de TB	Seringue BD	309659
Tubes de microcentrifugation de 2,0 ml	Scientifique américain	1420-2700
Ciseaux chirurgicaux - Sharp	Outils scientifiques fins	Référence 14002-14
Ciseaux Bonn extra fins	Outils scientifiques fins	Référence 14084-08
Minuterie/chronomètre à gros chiffres	Fisher Scientific	S407992
Stéréomicroscope	Zeiss	Stemi SV6
Ciseaux à ressort Cohan-Vannas	Outils scientifiques fins	Référence 15000-02
Collagénase de Clostridium histolyticum, type I	Sigma Sciences de la Vie	Réf. C0130-1G
Dispase II (protéase neutre, grade II)	Sigma-Aldrich (Roche)	4942078001