Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Anesthésie et canulation trachéale
- Pesez la souris pour déterminer la posologie des anesthésiques, les analgésiques postopératoires et le volume courant du ventilateur. Préchauffez le coussin chauffant à 37 °C. La configuration chirurgicale est illustrée à la figure 1.
- Injecter à la souris par voie intrapéritonéale un mélange de kétamine et de xylazine à une dose de 80 mg/kg et 10 mg/kg, respectivement.
- Rasez rapidement la fourrure de souris sur la gorge et le côté gauche de la cage thoracique à l’aide d’un rasoir électrique.
- Vérifiez la profondeur de l’anesthésie en pinçant la queue et/ou les pattes arrière et installez l’animal en position couchée sur le coussin chauffant. Placez une petite compresse de gaze sous la tête de l’animal pour éviter la surchauffe des yeux. Appliquez un gel oculaire pour éviter la sécheresse oculaire.
- Fixez les quatre membres avec du ruban adhésif sur la surface du coussin chauffant. Passez une boucle de suture en soie 5-0 sous les incisives supérieures et collez l’extrémité de la boucle avec du ruban adhésif sur le coussin chauffant. Cela permettra de garder la gueule de l’animal ouverte et facilitera la canulation.
- Appliquez de la crème dépilatoire sur les zones pré-rasées et massez doucement à l’aide d’un coton-tige pendant 1 min. Essuyez l’excédent de fourrure et de crème avec une gaze. Utilisez des gouttes de solution saline à 0,9 % et de la gaze pour nettoyer les zones d’incision. Appliquez des morceaux de gaze stérile sur la gorge et le thorax rasés et trempez-les dans de l’iodopovidone.
note: Nous recommandons l’application d’un anesthésique local (lidocaïne ou bupivacaïne) sur les sites d’incision.
- Réglez le ventilateur à un volume courant de 7 mL/kg et à un taux de ventilation de 140 coups/min
note: Désormais, travaillez sous un stéréomicroscope de microchirurgie.
- Tenez la peau au centre de la gorge et effectuez une incision de 0,5 cm en suivant une ligne caudale/céphalique à l’aide de petits ciseaux. Séparez les lobes de la glande salivaire, puis séparez doucement le fascia du muscle sterno-hyoïdien avec une pince de dissection incurvée jusqu’à ce que le larynx et la trachée soient visibles. Sécurisez les bords de l’ouverture à l’aide d’écarteurs fixés à des élastiques.
note: Faites cette étape sans incision des muscles. Un opérateur formé sera en mesure d’intuber l’animal via la cavité buccale sans visualisation de la trachée, ce qui rendra cette étape facultative.
- Tenez doucement la langue sur le côté. À l’aide d’une pince, insérez l’aiguille interne émoussée d’une canule de 16 G dans la trachée. Visualisez l’insertion correcte dans la trachée par l’incision de la gorge.
- Raccordez la canule au ventilateur et assurez une ventilation correcte en plaçant le tube d’évacuation dans l’eau. La présence de bulles indique une intubation correcte.
note: Afin de garder les tissus humides pendant l’opération, placez une gaze stérile imbibée d’une solution saline à 0,9 % et d’iodopovidone sur l’incision de la gorge. Contrôlez l’humidité pendant la procédure.
2. Ligature de l’artère coronaire LAD
- Relâchez la patte antérieure gauche du ruban adhésif et déplacez délicatement la souris en position de décubitus du côté droit. Fixez le membre antérieur gauche une fois que l’animal est dans la bonne position.
- Identifiez la ligne entre les petits et grands muscles pectoraux gauches et faites une incision cutanée oblique sur 1 cm avec des ciseaux en suivant la ligne. Avec des micro-ciseaux émoussés dissectionnants, séparez le fascia des muscles pectoraux sans incision. Maintenir les muscles pectoraux séparés par des écarteurs attachés à des élastiques.
- Réglez le ventilateur avec une pression positive en fin d’expiration (PEP) de 3 cm H2O.
- Ouvrez la cavité thoracique à l’aide d’une pince émoussée au niveau du 3e espace intercostal entre les 3e et 4e côtes. Évitez de toucher l’artère thoracique interne car il y a un risque de saignement. Ne touchez pas le cœur ou les poumons. Appliquez deux écarteurs dans la cage thoracique, un sur chaque côte (figure 2A).
- À l’aide d’une pince fine incurvée, retirez délicatement le péricarde et séparez-le sans endommager le cœur et les poumons.
- Localiser l’artère coronaire descendante antérieure gauche (DAL). L’artère LAD se présente sous la forme d’une ligne rouge vif superficielle allant du bord de l’oreillette gauche vers l’apex.
- À l’aide d’un porte-aiguille, passez une suture en soie 7-0 sous le DAL à 2 à 3 mm sous les oreillettes gauches. Tirez lentement sur la soie pour éviter une déchirure du tissu cardiaque. Attachez la ligature avec trois nœuds. La partie inférieure gauche du ventricule gauche pâlit instantanément lors de la ligature (Figure 2B–E).
note: Il est important de ne pas aller trop profondément dans la cavité ventriculaire ou de rester trop superficiel. Pour les animaux opérés en simulacre, tirez la soie de suture sous le DAL et retirez-la lentement en évitant la déchirure des tissus.
- Relâchez les écarteurs de côtes, tenez la 3ème côte avec une pince et faites deux passages avec une suture en soie 6-0 sous les 3ème et 4ème côtes.
prudence: Ne pas perforer le cœur ou le poumon. Ne serrez pas encore les nœuds.
- Mettez trois gouttes de solution saline à 37 °C 0,9 % dans l’ouverture et fermez le tube d’échappement périmé pendant 2 ou 3 cycles respiratoires pour gonfler correctement les poumons. Serrez la suture et fixez-la avec deux jets.
- Relâchez les écarteurs qui retiennent les muscles et aidez-les à retrouver leur bonne place.
- Fermez la peau thoracique avec deux points de suture en soie 5-0 et fixez-la avec deux jets. Fermez la peau de la gorge avec un point de soie de suture 5-0 et fixez-la avec deux jets.
