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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Protocole EHS
- La veille du protocole EHS, placez la souris dans la chambre environnementale à température ambiante (~25 °C, ≈30 % d’humidité relative) pour s’acclimater à la chambre.
- Utilisez un système d’acquisition de données pour recueillir la température centrale (Tc) continue, calculée en moyenne sur des intervalles de 30 s pendant la nuit.
- Le matin du protocole EHS, assurez-vous que la souris est à une température diurne normale ou inférieure à celle-ci avant d’augmenter la température de la chambre (c’est-à-dire 36 à 37,5 °C). Cela permet de s’assurer que la souris n’a pas de fièvre et n’a pas subi de stress excessif pendant cette période.
- Une fois que la souris est stable et dans une plage de température centrale normale au repos, retirez la nourriture et l’eau et pesez l’animal. Fermez la porte de la chambre et augmentez la température de la chambre jusqu’à un objectif de 37,5 °C et 40 à 50 % d’humidité relative, ou la température et l’humidité ambiantes souhaitées. Vérifiez la température et l’humidité de la chambre à l’aide d’un moniteur de température et d’humidité calibré.
- Entourez la chambre d’un rideau occultant pour minimiser la lumière et les perturbations pendant le protocole. Surveillez la souris en continu pendant le protocole à l’aide de caméras à distance éclairées par IR. Focalisez une deuxième caméra sur le moniteur de température et d’humidité, placé près de la roue de course. Effectuez tous les ajustements du contrôleur pour le point de consigne de la chambre environnementale afin d’assurer des lectures de température précises à proximité de l’animal.
- Une fois que la chambre a atteint sa température cible mesurée par la deuxième caméra du moniteur de température (cela peut prendre ~30 min), ouvrez rapidement la porte de la chambre et placez la souris dans la roue de course forcée.
- Lancez le protocole de roue de roulement forcé à une vitesse de 2,5 m/min et augmentez la vitesse de 0,3 m/min toutes les 10 minutes jusqu’à ce que la souris atteigne un Tc de 41 °C. Une fois que la souris a atteint cette température centrale, laissez la vitesse rester constante jusqu’à la limitation des symptômes, caractérisée par une perte de conscience apparente, une chute en arrière ou un évanouissement, et l’incapacité de continuer à courir ou de s’accrocher à la roue. Confirmez ce point de temps lorsque la souris effectue trois rotations vers l’arrière sur la molette sans signe de réponse physique. Vous pouvez également identifier un critère d’évaluation sans cruauté en suivant les règles locales de l’IACUC pour déterminer quand arrêter le protocole (p. ex., lorsque Tc ~43 °C). Ce critère d’évaluation est légèrement supérieur à la limitation des symptômes chez pratiquement toutes les souris.
- Pour exécuter le protocole de refroidissement rapide (R), une fois que la souris atteint la limitation des symptômes, arrêtez la molette et retirez-la immédiatement de la molette à rotation forcée. Pesez la souris et remettez-la dans sa cage d’accueil pour qu’elle récupère à température ambiante. Pendant ce temps, laissez la porte de la chambre ouverte et remettez le point de consigne de l’incubateur à température ambiante pour permettre à la chambre de refroidir rapidement. Cette procédure permet d’obtenir >99 % de survie à long terme.